龚绍慧，鄢腾峰，吕世刚，叶敏华，吴淼经，祝新根

(南昌大学第二附属医院神经外科，南昌 330006)

胶质瘤常见于成年人，是中枢神经系统最为恶性的原发性肿瘤[1]。在过去的10年中，胶质瘤的治疗方式主要是手术治疗和联合放化疗[2]。随着分子生物学的发展，对胶质瘤发病机制得到了进一步的认识，在胶质瘤的分子研究中已描述了几种遗传和表观遗传学的改变[3-4]。因此，探索更多新的潜在分子机制对于胶质瘤的分子治疗有着重要意义。本研究探讨miR-586对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。

1 材料与方法

1.1 样本及细胞系

人脑组织标本包括6例非肿瘤脑组织和30例胶质母细胞瘤脑组织标本，均来自南昌大学第二附属医院神经外科，经患者及家属知情并签署知情同意书后，将标本留取并放在液氮罐中冻存。本研究经本院医学伦理学委员会同意。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养、转染及分组

取出在液氮中冻存的胶质瘤细胞及人正常星形胶质细胞，用含10%血清的培养基于37 ℃、5%CO2的孵育箱中培养，当细胞贴壁生长至70%～80%时进行细胞传代。选择生长状态良好的U87细胞，按照Lipofectamine 3000试剂(美国Invitrogen公司)说明书进行转染，在培养24～48 h后进行下一步实验。

1.2.2 实时荧光定量PCR实验

按照PCR试剂盒(广州市锐博生物科技有限公司)说明书进行实时荧光定量PCR实验，得到各组循环阈值(CT值)，以GAPDH作为内参基因，计算2-ΔΔCt值。

1.2.3 CCK-8实验

按照每孔2000个细胞种植在96孔板中，按照CCK-8试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)说明书，分别在0、24、48、72、96 h时，在对应孔中加入CCK-8试剂，并在酶标仪上设定CCK-8检测参数(450 nm波长处的吸光度)后，重复测量3次吸光度，绘制生长曲线，并进行统计分析。……