王希方，雷 雨，刘 屹，岳青芳，侯银银，曹 菲，孙 超，王海鹏，陆王锋

(1.陕西省人民医院肿瘤内科，西安 710068；2.商洛市中心医院胃肠外科，陕西 商洛，726000)

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，也是导致癌症相关死亡的主要原因。肺腺癌约占非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的80%，已成为最常见的亚型[1-2]。肺腺癌发病率呈快速上升趋势，且其发病机制至今仍不清楚[3-4]。因此，对引起肺腺癌患者癌变的相关分子机制进行广泛的研究十分必要。6-磷酸果糖-2-激酶/2-果糖-2,6-双磷酸酶(PFKFBs)为一双功能酶，具有激酶和磷酸酶活性，可因不同的基因编码4个不同的PFKFBs(PFKFB1,PFKFB2,PFKFB3,PFKFB4)，且酶的活性和组织表达谱完全不同[5]。在PFKFBs成员中，PFKFB3的激酶活性更高，双磷酸酶活性更低。这增加了果糖2,6-二磷酸(F2,6BP)的产量，在正常和病理生理条件下严格控制糖酵解速率[6-7]。既往研究[8]发现PFKFB3在不同器官和肿瘤细胞中广泛表达，如胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、甲状腺癌等，它会引起新陈代谢的改变，导致肿瘤细胞的增殖和存活。PFKFB3具有类似于癌基因的调控元件，且PFKFB3的高表达是肺腺癌患者总体生存期较差的独立预后标志物[9]。本研究通过敲减肺腺癌细胞A549中PFKFB3，与未敲减的A549细胞比较细胞活力、细胞周期、细胞转移，探讨PFKFB3敲减对肺腺癌细胞A549增殖和转移的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂

人肺腺癌细胞系A549细胞购自美国典型培养物保藏中心。Lipofectamine TM 2000以及逆转录试剂盒(日本TaKaRa公司)，PCR引物序列由浙江格鲁斯特生物科技公司合成。基础培养基和胎牛血清(美国Biological Industries)，si-PFKFB3 1/2(美国Sigma公司)，青霉素和链……