（河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室，郑州 450002）

牛支原体（Mycoplasma bovis）是一种主要的、但通常被忽视的病原体，它属于柔膜体纲，是以缺乏细胞壁、最小的、能自我复制为特征的微生物。主要引起牛的肺炎、关节炎、乳房炎、角膜结膜炎、生殖道炎症以及流产和不孕等疾病，对全世界的养牛业构成了主要威胁[1,2]。在中国，自2008年以来，该病原体已被证明对牛的健康构成威胁，大约10%的致死率主要是由牛支原体引起的肺炎，到目前为止，还没有有效的疫苗来阻止牛支原体的感染。与此同时，由于细菌耐药性的增强，抗生素治疗正在降低其有效性，使得它的控制变得难以实现和困难[3,4]。鉴于此，本研究从河南省肉牛屠宰场中采集病料进行了牛支原体分离鉴定，旨在对河南省牛支原体的流行病学进行调查，为牛支原体的诊断、疫苗的研制开发以及牛支原体病的综合防治奠定基础。

1 材料和方法

1．1 病料与毒株

于2019年12月，从河南省某肉牛屠宰场采集肺等病料共计320份。样品低温运送至实验室。牛支原体HB0801株，由华中农业大学郭爱珍教授惠赠。

1．2 主要试剂

PPLO肉汤粉、TSA（Tryptic Soy Agar，胰蛋白大豆琼脂），购自BD有限公司；酵母粉、琼脂粉，购自美国BD公司；葡萄糖、酚红，购自上海国药集团公司；MEM、马血清，购自Hyclone公司；青霉素，购自华北制药集团公司；精氨酸，购自Roche公司；2×Direct PCR Mix、Hot Start Taq酶、Ezup柱式动物基因组DNA抽提试剂盒，购自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1．3 培养基的配制

PPLO液体培养基：PPLO肉汤粉10.5g、葡萄糖2.5g、酵母粉2.5g，溶于440mL超纯水中，115℃灭菌15min，加MEM 5mL、马血清50mL、8万单位青霉素5mL、10%精氨酸10mL和1% 酚红500μL。……