龙胆草提取物对吉富罗非鱼肌肉品质的影响

2021-01-06赵耀陈培赟陈会琴袁茵宋浩清赫明漪高宇孔令富毕保良

江西水产科技 2021年6期

赵耀　陈培赟　陈会琴　袁茵　宋浩清　赫明漪　高宇　孔令富　毕保良

摘要：以龙胆草提取物作为添加剂，按照不同比例配制等氮等能饲料，对罗非鱼幼鱼进行分组饲养。通过11周养殖试验，采集鱼体肌肉组织，测定不同添加量组间肌肉常规及其氨基酸组成等指标，以研究龙胆草作为饲料添加剂对罗非鱼生长及肌肉品质的影响。结果表明，龙胆草提取物作为饲料添加剂能够显著提升吉富罗非鱼具有提高肌肉粗蛋白含量，增加必需氨基酸以及鲜味氨基酸含量的作用，其中以0.3%为最适添加量。

关键词：龙胆草;吉富罗非鱼;氨基酸;肌肉品质

中图分类号：S963 文献标识码：A

自上世纪50年代末罗非鱼经越南引入国内市场后，便在我国迅速壮大，截至目前罗非鱼作为我国具有国际竞争实力的品种之一，稳居世界首位。近些年来，随着高密度养殖以及环境日益恶化，导致病害频发，药物滥用，造成环境污染、耐药菌株等问题严重影响罗非鱼产业的可持续发展。而中草药作为我国历史文化中的一块瑰宝，因其成本低、加工方便、资源丰富、低毒副作用等特性，且同时具有补充营养，提高机体特异性和非特异性免疫的功能而深受人们青睐。其中龙胆草作为龙胆科多年生草本植物，主产于云南、贵州、四川等地，具有保肝、利胆、镇痛、抗菌、抗病毒、抗炎等药理作用[1]，有望作为一种免疫增强剂应用到水产饲料中。本试验在饲料中将龙胆草提取物龙胆苦苷按照一定比例添加，以吉富罗非鱼为研究对象，探究龙胆草提取物对肌肉常规及组份的影响，以期为罗非鱼饲料中添加龙胆苦苷最适添加量提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料配制

以豆粕、菜粕和鱼粉为主要蛋白源，豆油为脂肪源，配制基础饲料。在此基础饲料中分别添加0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的龙胆苦苷，替代饲料配方中相同质量的面粉，配制5种等氮等能饲料。实验所用龙胆苦苷购自陕西朗森生物科技有限公司，含量为5%。试验饲料配方如表1所示。

1.2 试验动物及饲养管理

试验所用吉富罗非鱼苗种由西双版纳云博水产养殖开发有限公司提供，幼鱼平均体重0.5 g。养殖试验在云南农业大学动物科学技术学院水产养殖实验室中进行。试验前对罗非鱼幼鱼用对照组饲料暂养2周，选择大小均匀、健康、有活力的罗非鱼，随机分入18个水族箱（6个试验处理组，每组3个重复，每个重复40尾鱼）进行养殖试验。每天7：00、18：00各投喂1次至饱食状态，摄食后2小时换水1次，换水量为水族箱总体积的1/2，养殖用水均为曝气24小時以上的除氯自来水，水族箱内采用内循环流水系统，水体流速10 L/秒，养殖期间采用气石连续充氧，水温保持在29±1℃。饲养周期为11周。

1.3 样品采集和保存

养殖试验结束前对罗非鱼禁食24小时，从每个水族箱中随机选取6尾试验鱼，使用MS-222进行麻醉，去鳞、去皮后，取其侧线上，背鳍以下的两侧肌肉，放入无菌密封袋中，迅速置于液氮中快速冷冻，然后转移至-80℃超低温冰箱中储存备用。

1.4 分析测定

肌肉常规成分分析参照AOAC法。水分测定采用冷冻干燥法;粗蛋白质含量的测定采用凯氏定氮法测定;粗脂肪的测定采用索氏提取法（以石油醚为溶剂）测定;粗灰分的测定为550℃灼烧法测定。肌肉组织中氨基酸的测定采用柱前衍生法，采用日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪测定。

营养价值的评价根据粮食与农业组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）1973年建议的每克氮氨基酸评分标准模式和中国预防医学科学院、营养与食品卫生研究所提出的鸡蛋蛋白质的氨基酸评分模式，将所测得的必需氨基酸含量（占干样）换算成每克氮中含氨基酸毫克数（乘以62.5）进行比较，氨基酸评分（AAS）、化学评分（CS）和必需氨基酸指数（EAAI）[2]按以下公式计算：

（3）式中n为比较的氨基酸数，aai为待评蛋白质中某一必需氨基酸占必需氨基酸总量百分比，AAi为鸡蛋蛋白质中该必需氨基酸占必需氨基酸总量百分比。

1.5 数据统计分析

采用SPSS19.0分析软件对样本进行单因素方差分析（ANOVA），当处理组之间存在显著性差异（P<0.05）时，用Duncan's检验进行多重比较分析。所有试验结果均以“平均值±标准误”（means±SEM）表示。

2 结果与分析

2.1 龙胆草提取物对吉富罗非鱼肌肉常规的影响

由表2可见。当饲料中添加量达到0.2%～0.3%时，鱼体肌肉中的粗蛋白含量显著高于（P<0.05）对照组，整体呈现先上升后下降的趋势。各组肌肉水分、粗脂肪以及灰分间无显著性（P>0.05）差异。

2.2 龙胆草提取物对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组份的影响

分析结果如表3所示。饲料中添加龙胆草提取物饲养的吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成中，含量最高的前3种氨基酸分别为谷氨酸、天冬氨酸和赖氨酸，与其他常规淡水鱼类检测结果相同。谷氨酸、蛋氨酸、组氨酸和精氨酸4种氨基酸无显著性差异。甘氨酸、脯氨酸和胱氨酸3种氨基酸呈现出总体逐渐上升的趋势，0.5%添加量时达到最高，含量分别为甘氨酸4.42%、脯氨酸2.81%和胱氨酸0.19%。除此以外，其余氨基酸如：天冬氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、丝氨酸、酪氨酸，共计10种氨基酸均呈现先上升后下降的趋势，在添加量达到0.3%时氨基酸含量达到最高。在总氨基酸中也得到相同的印证，由表4可知，0.3%添加量时总氨基酸含量达到峰值（90.67%）显著高于对照组别，对照组总氨基酸含量（85.59%）均低于添加龙胆草提取物的试验组，说明饲料中添加龙胆草提取物对于吉富罗非鱼的肌肉组份有一定的影响。

2.3.1 龙胆草提取物对吉富罗非鱼肌肉鲜味氨基酸组份的影响

鱼肉的鲜美味道主要由天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸4种氨基酸的含量决定。由表4可知，4种鲜味氨基酸中谷氨酸含量最高，其次为天冬氨酸，最后依次为丙氨酸和甘氨酸。天冬氨酸（12.12%）和丙氨酸（5.46%）在0.3%添加量时含量达到最大值，而甘氨酸（4.42%）则是在0.5%添加量时含量达到峰值。三种具有显著差异的鲜味氨基酸在对照组中所含比例均为同试验组最低，分别为天冬氨酸（11.38%）、丙氨酸（5.20%）、甘氨酸（4.05%）。證明龙胆草提取物的适量添加对于吉富罗非鱼鲜味氨基酸的提升具有一定作用。同样鲜味氨基酸的总和显示在0.3%添加量时鲜味氨基酸的总量为（38.99%）显著高于对照组。

2.3.2 龙胆草提取物对吉富罗非鱼肌肉必需氨基酸组份的影响

吉富罗非鱼经不同添加量的龙胆草提取物饲料投喂后肌肉中必需氨基酸的含量见表5。如表所示，必需氨基酸总和在0.3%时（32.73%）显著高于对照组（31.08%）。其中由于色氨酸遭盐水水解破坏，故无色氨酸含量。在已测知的七种必需氨基酸中，含量最高的是赖氨酸，其次为亮氨酸、缬氨酸以及苏氨酸。蛋氨酸在各组间无显著性差异外，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸4种必需氨基酸均在0.3%添加量时达到最大值，显著高于对照组。亮氨酸、赖氨酸以及苏氨酸在0.4%添加量时显著低于0.3%添加量。

2.4 营养价值的评定

食品蛋白质的营养价值在很大程度上取决于其所含必需氨基酸的含量与组成比例。根据表6所示，以AAS为指标分析，吉富罗非鱼的第一限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸，第二限制性氨基酸为缬氨酸;以CS为指标分析，吉富罗非鱼的第一限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸，第二限制性氨基酸则为苯丙氨酸+酪氨酸，可以看出不论以何种模式评价，不同龙胆草提取物添加量的试验组与对照组限制性氨基酸相同，蛋氨酸+胱氨酸均为罗非鱼的第一限制性氨基酸。以鸡蛋蛋白质中必需氨基酸含量为标准对试验罗非鱼肌肉进行必需氨基酸指数（EEAI）计算，0.3%添加量评分最高最48.13，对照组评分最低为45.66。

3 讨论

从肌肉常规方面来讲，学界现普遍认为，当鱼肉中的水分含量较高时，相应的肌肉中蛋白和脂肪含量会降低，其肌肉品质就差;相反，当鱼肉中的水分含量较低时，其蛋白和脂肪含量就会升高，在食用口感上表现为肌肉品质提升，鱼肉更加细嫩[3]。中草药的主要有效成分一般包括植物多糖、生物碱、有机酸以及苷类等，尤其中草药所含的三萜皂甙成分，能明显提升养殖动物肌肉中的肌苷酸含量和肌肉的抗氧化性能，降低胆固醇含量，从而有效改善养殖动物的肌肉品质。本试验中所采用龙胆草提取物的活性成分主要为龙胆苦甙，属裂环环烯醚萜苷类化合物[4]。罗庆华等[5]在鲤鱼饲料中加入2%、4%、6%的杜仲叶粉发现，杜仲叶粉可显著提升鲤鱼肌肉中粗蛋白含量，以及降低肌肉中粗脂肪的含量，但对水分、粗灰分无显著影响。同样通过在饲料中添加不同浓度的杜仲提取物、大蒜素和二者配伍的复方饲养草鱼，证明该提取物可显著提升草鱼肌肉中的蛋白质含量，降低脂肪含量[6]。这与本试验龙胆草提取物显著提升罗非鱼肌肉中粗蛋白的结果相似，但在本试验中粗脂肪未见显著差异，可能与饲养周期过短，鱼体脂肪沉积缓慢或受鱼种影响的缘故，粗脂肪未表现出显著差异性。马国红[7]将4种复方中草药以3‰的添加量添加在饲料中用于投喂鲤鱼，研究表明，与对照组相比较，试验所用的各复方中草药不同程度的提高了鲤鱼粗蛋白含量，且具有降低饲料系数的效果，但无显著性差异性。而在由黄芪、黄柏等组成的复方2中，鲤鱼肉体中氨基酸含量显著高于对照组。但在邱小琮[8]的研究中表明，在饲料中添加2%山楂、麦芽等粉碎按比例制成复方中草药，投喂异育银鲫仅仅能够显著提升异育银鲫肌肉中脂肪含量，而对鱼肉中水分、蛋白质、各类脂肪酸、水解和游离氨基酸的含量均无显著变化，营养价值和呈味氨基酸的含量也无显著影响。

当今社会随着人们生活质量的提高，饮食习惯也逐渐由吃得饱向吃得好转变。而鱼肉作为世界公认的优质蛋白源，必不可少的成为人们饮食中关注的焦点。众所周知，蛋白是由氨基酸脱水缩合形成的，而呈味氨基酸作为氨基酸中的一类，主要包括天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸等，肌肉中呈味氨基酸含量的多少，直接影响着肉品品质。孟晓林、冷向军[9-10]等在试验中发现，通过在饲料中添加4%、6%杜仲粉投喂鲤鱼，不仅可以使鲤鱼肌肉的鲜味氨基酸含量显著升高，而且饲养鲤鱼的背部肌纤维变细、腹部肌细胞直径减小，鱼肉品质得到极大的改善。同样张耀武[11]等人用黄芩、茯苓、板蓝根等多种中草药组成的复方中，通过与饲料混合饲养黄河鲤鱼，试验结果表明随着添加量的提升，该复方中草药对黄河鲤鱼肌肉中必需氨基酸和鲜味氨基酸总量比值均有显著提升。本试验结果显示，在商品饲料中添加3%的龙胆草提取物，能显著提高吉富罗非鱼肌肉中鲜味氨基酸以及必需氨基酸含量，与上述作者结果相近。

因此，根据罗非鱼饲料中添加龙胆草提取物对罗非鱼肌肉品质的影响试验结果综合分析，建议最适添加量为0.3%，即4000 mg/kg为宜。

参考文献

[1]孙蓉，高静雷，刘姗. 金龙胆草研究进展[J]. 中草药，2018，49（19）：4710-4716.

[2]任洁，韩育章，管敏，等. 3种鲫鱼营养成分分析与评价[J]. 水利渔业，2008（01）：35-37.

[3]张耀武，蔡冰，陈万光. 复方中草药制剂对黄河鲤鱼生长性能和肌肉品质的影响[J]. 科学养鱼，2012（12）：72-73.

[4]王飒，谢国勇，秦民坚. 红花龙胆的药学研究进展[J]. 中国野生植物资源，2017，36（04）：53-59.

[5]罗庆华，卢向阳，李文芳. 杜仲叶粉对鲤鱼肌肉品质的影响[J]. 湖南农业大学学报（自然科学版），2002（03）：224-226.

[6]罗庆华，贺建华，刘清波，等. 杜仲大蒜复方添加剂对草鱼生产性能及肌肉品质的影响[J]. 水利渔业，2008（03）：69-71.

[7]马国红，宋理平，张延华，等. 4种复方中草药对鲤生长性能及其体成分的影响[J]. 大连海洋大学学报，2019，34（01）：87-93.

[8]邱小琮，周洪琪，横山雅仁，等. 中草药添加剂对异育银鲫肌肉生化成分的影响[J]. 上海水产大学学报，2003（01）：24-28.

[9]孟晓林，聂国兴. 杜仲对草鱼生长及成鱼肌肉成份影响试验[J]. 河南水产，2014（03）：30-31.

[10]冷向军，孟晓林，李家乐，等. 杜仲叶对草鱼生长、血清非特异性免疫指标和肉质影响的初步研究[J]. 水产学报，2008（03）：434-440.