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猪圆环病毒3型荧光定量PCR检测方法的建立及其在猪体中的组织分布研究

2021-01-01石宝兰徐丹丹顾素云漆世华李婷婷谢红玲

中国兽药杂志 2021年11期
关键词:检测方法

薛 霜,石宝兰,徐 松,徐丹丹,顾素云,漆世华,李婷婷,冯 钊,谢红玲

(国药集团动物保健股份有限公司,武汉 430075)

猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)是近几年发现的一种新型的猪圆环病毒,基因组全长2.0 kb,为单链环状、无囊膜的DNA病毒,形态呈正二十面体形,GC含量50%,包含3个主要开放阅读框(opening reading frame,ORF),与其他圆环病毒科病毒具有类似的基因组结构,但衣壳蛋白氨基酸序列同源性很低。PCV3与PCV2的Cap蛋白同源性仅约30%,且二者在Cap蛋白抗原表位上无任何同源性,表明这2种毒株之间不具有交叉免疫保护特性。PCV3能引起猪的皮炎肾病综合征、繁殖障碍以及心脏和多系统的炎症反应[1-2],与PCV2引起的临床症状极其相似,给临床确诊带来一定的难度。自2016年以来,PCV3已在多个国家猪群中相继被检测到[3-5]。我国研究人员通过大范围的检测发现,该病原在来自我国多个省份的样品中也有检测到[6-7]。

本研究以临床分离的PCV3阳性组织毒感染断奶仔猪,并通过建立的荧光定量PCR检测方法研究PCV3在猪不同组织脏器中的感染情况,以期为PCV3感染的诊断、预防和控制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 PCV3阳性组织毒悬液,采自湖北某猪场一PCV3阳性猪,由国药集团动物保健股份有限公司制备并鉴定;PCV1、PCV2、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),均由国药集团动物保健股份有限公司鉴定和保存;大肠杆菌Trans5α感受态细胞,购自北京全式金生物技术有限公司。

1.2 主要试剂 Taq DNA聚合酶、DNA片段回收纯化试剂盒、质粒小量快速提取试剂盒、病毒核酸小量提取试剂盒、pMD18-T载体和Premix Ex Taq试剂盒(探针法)均购自宝生物工程(大连)有限公司。……

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