杨贇昀 吴虓飞 胡宇驰

(北京市药品检验所,北京 102026)

逐瘀通脉胶囊为已上市独家复方中药品种,并已列入国家食品药品监督管L总局国家药品标准。其组成成分为虻虫、水蛭、桃仁、大黄。功能主治为破血逐瘀,通经活络,主治血瘀型眩晕证,症见眩晕、头痛耳鸣、舌质暗红、脉沉涩。

广大临床医师在多年的临床应用中,发现逐瘀通脉胶囊除了上述原有功能主治之外,对脑梗死等缺血性脑血管疾病具有较好的治疗作用,能够改善患者的症状。

本研究以期为逐瘀通脉胶囊治疗脑梗死这一新的功能提供药效学依据,并为新适应症在临床的合L应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 动物

SD大鼠,SPF/VAF级,82只,体质量(189.54±9.27)g,雌雄各半,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,实验动物生产许可证号:SCXK(京)2016-0011,质量合格证明号:0261504。

1.2 药物与试剂

逐瘀通脉胶囊(批号:20100702),由哈药集团三精千鹤制药有限公司提供;维脑路通片(批号:111204),购自北京诚济制药有限公司和亚宝药业集团股份有限公司;步长脑心通胶囊(批号:111252),购自陕西步长制药有限公司。

戊巴比妥钠(批号:F20070124),Sigma公司生产,中国医药集团上海化学试剂公司分装。

1.3 剂量设计

逐瘀通脉胶囊,口服,2粒/次,3次/d,4周为一疗程,人(70 kg)总用量为1.2 g/d,相当于17.1 mg/kg,按照体表面积折算等效剂量,大鼠约为:108 mg/kg。因此,设计可考虑大鼠药效试验高剂量为200 mg/kg,中剂量为120 mg/kg,低剂量为50 mg/kg。

维脑路通片,口服,2～3片/次,3次/d,人(70 kg)总用量为540 mg/d,折合成大鼠的等效剂量为54 mg/kg。参照临床前研究文献用量,该药的大鼠口服剂量约为100 mg/kg。

步长脑心通胶囊,口服,2～4粒/次,3次/d,人(70 kg)总用量为4 800 mg/d,折合成大鼠的等效剂量约为435 mg/kg。参照临床前研究文献用量,该药的大鼠口服剂量约为800 mg/kg。

配制方法:所有药物蒸馏水配制。

1.4 造模

雄性SD大鼠82只,取其中合格72只,起始体质量(189.54±9.27)g,给药时体质量(256.55±38.97)g。参考Torre等[1-2]文献方法,永久性结扎大鼠双侧颈总动脉建立大鼠慢性低灌注性脑缺血损伤模型。大鼠用2%戊巴比妥钠3 m L/kg腹腔内注射麻醉,仰卧位固定,颈部去毛、消毒,颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,分别结扎双侧颈总动脉的远近端,并从中间剪断,以确保阻断颈总动脉血流。另选取剩余10只作为假手术组,除不结扎、不剪断双侧颈总动脉外,其余过程与手术组相同,各组动物手术创口均用青霉素溶液涂抹抗菌。各组大鼠同条件饲养。

1.5 分组给药

各组均于造模15 d后,挑选取状态较好,手术创口愈合较好的动物分组给药,分为6组:模型组、阳性对照Ⅰ组(维脑路通片100 mg/kg)、阳性对照Ⅱ组(步长脑心通胶囊800 mg/kg)、逐瘀通脉胶囊200、100、50 mg/kg剂量组,10只/组,5只/笼,自由摄食与饮水,连续给药14 d。

1.6 指标检测

1.6.1 Morris水迷宫行为学检测:给药前进行训练,给药14 d后利用Morris水迷宫对各组动物学习记忆能力进行检测,测试内容包括:空间探索实验[3]。数据由水迷宫统计软件获得,采用图像处L算法,实时跟踪大鼠运动轨迹,得出大鼠在设定区域内经过的路径和所花的时间以及其他相关数据。

空间探索指标:经过平台次数、经过有效区次数、总路程、平台停留时间、平台游经距离、有效区停留时间、有效区游经距离。

本工程粗集料采用怀集县东八里碎石，其各项技术指标检验结果如表2所示，均满足规范要求Ⅱ级，部分指标已满足Ⅰ级要求。

1.6.2 脑湿质量、脑干质量、脑含水量、脑系数:水迷宫检测结束后麻醉动物,将动物断头取脑,迅速称量其质量,后置于100℃烘箱内烘烤24 h用同一天平再次称质量,以(湿质量-干质量)/湿质量×100%即为相对含水量,脑系数=全脑质量/体质量×100%。

1.7 统计方法

所有实验数据采用SPSS 11.5软件进行统计分析,多组比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)。实验结果用平均值±标准差(±s)表示,P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对慢性低灌注诱发脑缺血损伤大鼠空间探索能力的影响

空间探索试验中,第一象限仍为实验动物入水区域,第三象限为虚拟的平台区域,平台已经撤离,周围为有效区域。动物在平台区域停留的时间和距离、有效区停留的时间和距离越长,以及经过平台次数、经过有效区次数越多,表明动物空间探索记忆能力越强。

表1 逐瘀通脉胶囊对慢性低灌注诱发脑缺血损伤大鼠空间探索指标的影响Table 1 Effect of Zhuyu Tongmai capsule on the exploring activity of rats with chronic hypoperfusion of cerebral ischemia in morris water maze test

由表1可知,与假手术组比较,模型组动物在平台区域停留的时间和距离明显减少,在有效区停留的时间明显减少,在有效区停留的距离显著减少(P<0.05),经过平台次数显著减少(P<0.05),在第一象限停留的时间明显延长,在第一象限停留的距离显著延长(P<0.05)。

与模型组比较,逐瘀通脉胶囊200 mg/kg剂量组动物在有效区停留的时间、距离和经过平台次数显著增加(P<0.05),在平台区域停留的时间和距离明显增加,相应的在第一象限停留的时间和距离明显缩短,在第三象限停留的距离明显延长。表明当撤掉平台后,在120 s的时间内,给药组动物主动寻找原平台所在位置的能力明显高于模型组,显示出给药组动物的空间记忆能力及主动探索能力显著改善。因此,认为逐瘀通脉胶囊对慢性低灌注大鼠脑损伤导致空间探索能力的下降有明显的改善作用。

同样实验条件下,阳性对照药物维脑路通片组(100 mg/kg)、步长脑心通胶囊组(800 mg/kg)动物在平台区域停留的时间和距离、在有效区停留的时间和距离、经过平台次数均高于模型组,但未见生物统计学差异(P>0.05);在第三象限停留的距离明显延长,但未见生物统计学差异(P>0.05);维脑路通片组动物在第一象限停留的时间显著缩短(P<0.05),步长脑心通胶囊组动物在第一象限停留的时间和距离显著缩短(P<0.05、P<0.01)。这表明阳性对照药物对于慢性低灌注大鼠脑损伤导致空间探索能力的下降有一定的改善作用,但不十分显著。

表2 逐瘀通脉胶囊对慢性低灌性脑缺血大鼠脑组织损伤的影响Table 2 Effect of Zhuyu Tongmai Capsule on brain tissue injury of rats with chronic hypoperfusion of cerebral ischemia

2.2 对慢性低灌性脑缺血大鼠脑损伤的影响

由表2可知,与假手术组比较,模型组的脑湿质量,脑含水量及脑系数均显著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.05),表明慢性低灌注导致大鼠脑水肿损伤,脑组织含水量显著增加。

与模型组比较,逐瘀通脉胶囊200 mg/kg剂量组动物的脑湿质量、脑含水量、脑系数均显著下降(P<0.05),其他各剂量组脑湿质量、脑含水量均有明显的下降趋势,但未见生物统计学差异(P>0.05)。这表明逐瘀通脉胶囊对大鼠慢性低灌注致脑水肿有很好的改善作用。

同样实验条件下,阳性对照药物维脑路通片(100 mg/kg)、步长脑心通胶囊(800 mg/kg)与模型组比较,脑湿质量,脑含水量及脑系数均显著下降(P<0.05),表明阳性对照药可改善大鼠慢性低灌注所致的脑水肿。

3 讨论

上述结果显示,动物经过训练后,逐瘀通脉胶囊对慢性低灌注大鼠脑损伤导致空间探索能力的下降有明显的改善作用,并明显减轻脑缺血后的脑组织水肿现象。

脑梗死是缺血性卒中的总称,包括脑血栓形成、腔隙性梗死和脑栓塞等,约占全部脑卒中类型的70%。脑梗死是由于脑组织局部供血动脉血流的突然减少或停止,造成该血管供血区的脑组织缺血、缺氧导致脑组织软化、坏死,并伴有相应部位的临床症状和体征,如偏瘫、失语等神经功能缺失的症候。脑梗死是临床常见病、多发病,是我国发病率、死亡率和致残率最高的疾病之一,严重危害中老年人的健康,且近年来已呈现年轻化的发病趋势。

逐瘀通脉胶囊组方来源于张仲景所著的“四大经典”之一的《伤寒论》中的抵当汤,由虻虫、水蛭、桃仁、大黄四味活血化瘀的中药组成,方中虻虫、水蛭为主药,佐以桃仁、大黄协同作用[4]。现代药L学研究证实,逐瘀通脉制剂具有降低血液黏度、纤维蛋白原及血脂作用,抑制血小板聚集,改变血液流变学指标,降低毛细血管通透性及脑耗氧指数,扩张血管,增强血流量,改善脑缺血等作用。除此之外,逐瘀通脉胶囊还具有双向调节作用,阻止血栓形成,它既可降低血液黏度,抑制血小板聚集功能,缩短血栓长度及重量,改善血液流变学指标;又不影响凝血机制,不会出现高纤溶状态的出血倾向[5-7]。

本试验研究结果显示,逐瘀通脉胶囊给药组,特别是高剂量给药组动物的空间记忆能力及主动探索能力显著改善;解剖发现高剂量给药组动物的脑湿重、脑含水量、脑系数均显著下降。提示逐瘀通脉胶囊具有显著的改善脑缺血、缺氧状态,对局灶性脑缺血大鼠有显著保护作用,对缺血引起的大鼠神经行为学异常有显著改善作用,对脑缺血引起的大鼠学习记忆障碍有显著改善作用;临床上也有使用逐瘀通脉胶囊治疗慢性供血不足、脑血栓的相关应用研究[8-9],因此认为逐瘀通脉胶囊对脑梗死急性期脑组织保护以及恢复期神经功能缺损以及学习记忆能力的下降有较好的治疗作用。