王佳贺,王 楠,苑莉莉

0 引言

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌，对女性的生命健康构成了严重的危害[1-3]。近年研究发现，许多中药的有效成分通过调控肿瘤细胞自噬相关蛋白诱导肿瘤细胞自噬[4-7]。因此，探讨中药有效成分诱导肿瘤细胞自噬的分子机制对于卵巢癌的治疗具有重要的临床意义。土槿乙酸 (Pseudolaric acid-B，PAB)是由松科植物金钱松的根皮(土槿皮，又称土荆皮)及近根皮提取的二萜类化合物。PAB通过抑制肿瘤细胞黏附和迁移、促进肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤血管生成等发挥抗肿瘤作用[8-9]。但关于土槿乙酸能否诱导卵巢癌细胞自噬及相关机制的研究鲜有报道。

因此，本研究在前期实验的基础上，通过体外实验观察土槿乙酸是否能够诱导卵巢癌HO-8910细胞自噬和PI3K/Akt通路相关蛋白的变化，以及自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)及自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)是否能够影响土槿乙酸所致的卵巢癌HO-8910细胞自噬蛋白的表达，初步探讨土槿乙酸诱导HO-8910细胞自噬及其可能的机制。

1 材料和方法

1.1 主要试剂及仪器 RPMI 1640 培养基、胎牛血清购自Gibco 公司，3-MA 和RAPA为Sigma 公司产品，自噬相关抗体LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、β-actin及其他试剂均购于武汉博士德生物工程公司；流式细胞仪购自美国Backman公司；HO-8910 细胞购于中国科学院上海细胞库。

1.2 细胞培养 将HO-8910 细胞置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中，在培养箱中孵育(37 ℃，5%CO2)，当贴壁细胞生长到90%时，应用0.25%胰酶进行消化，再用0.02%EDTA处理细胞，以备进行细胞实验。

1.3 细胞处理……