郑云鹏 蔡丙杰 李旭阳 李冬芹 尹光文

郑州大学第一附属医院皮肤科450052

长 链 非 编 码RNA（long non ⁃ coding RNAs，lncRNA）和微小RNA（microRNA，miRNA）均属于非编码RNA，均参与肿瘤的发生发展过程［1］。皮肤鳞状细胞癌（简称皮肤鳞癌）是常见的皮肤恶性肿瘤［2］，手术、放疗和化疗联合治疗是晚期皮肤鳞癌的经典治疗方式，靶向和免疫治疗是其治疗的新方式［3］。研究表明，lncRNA、miRNA可能在皮肤鳞癌的发生、转移中发挥作用［4⁃5］。有报道显示，长链非编码生长停滞特异性蛋白6 反义RNA1（growth stasis specific protein 6 antisense RNA 1，lncRNA DLX6⁃AS1）在多种恶性肿瘤中高表达，其高表达与细胞增殖和侵袭有关［6⁃7］，但lncRNA DLX6⁃AS1在皮肤鳞癌中的作用尚不清楚。miR⁃16⁃5p在乳腺癌［8］和肾癌［9］中低表达，影响癌细胞的增殖、迁移和侵袭。核酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1（nuclear ubiquitous casein and cyclin ⁃ dependent kinase substrate1，NUCKS1）在胃癌中高表达，可促进癌细胞的侵袭［10］。我们通过在线工具starBase预测发现，lncRNA DLX6⁃AS1和miR⁃16⁃5p存在结合位点，且NUCKS1可能是miR⁃16⁃5p的靶基因，然而miR⁃16⁃5p和NUCKS1在皮肤鳞癌中的表达和作用尚不清楚。因此，我们探讨lncRNA DLX6⁃AS1靶向miR⁃16⁃5p/NUCKS1对皮肤鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。

材料与方法

一、材料

人皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞（细胞株号CVCL_0038）和皮肤鳞癌A431 细胞（细胞株号CVCL_0037）产自美国模式培养物集存库。DMEM高糖培养基、胎牛血清和胰蛋白酶（美国Hyclon 公司），NUCKS1抗体、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）抗体、基质金属蛋白酶（MMP）2 抗体和MMP9 抗体（美国Santa cruze公司），山羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶（HRP，北京百奥莱博科技有限公司）；Lipofectamine 2000 转染试剂、Total RNA 提取试剂盒、逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR［qRT⁃PCR试剂盒，宝生物工程（大连）有限公司］，双荧光素酶报告系统（dual⁃luciferase reporter assay system）（美国Promega 公司），lncRNA DLX6⁃AS1 抑制物（si⁃DLX6⁃AS1，5′⁃GATCGTAGGCTAACACATCCATGG AATCAAGAGTTCCATGGATGTGTTAGCCTATTTTT TGA⁃3′）、miR⁃16⁃5p 模拟物（miR⁃16⁃5p，5′⁃GCGGTTATAAATGCACGACGAT⁃3′）、miR⁃16⁃5p抑制……