郭秉楠 （ 徐州医科大学卫生应急研究所； 徐州医科大学附属医院急救中心，江苏004）

固有淋巴细胞（innate lymphoid cell，ILC）作为一种组织驻留细胞（tissue-resident cell），主要分布在肠、肺和皮肤等组织器官中，发挥维持组织稳态，组织修复，抗击各种病原体、过敏原及肿瘤等作用，在感染性疾病、自身免疫性疾病、炎症及肿瘤等疾病中具有重要意义[1-2]。根据表达转录因子及分泌细胞因子不同，ILCs 通常分为 ILC1，ILC2 和 ILC3[1]。其中ILC2 主要分泌 Th2 型细胞因子如 IL-4、IL-5、IL-9及IL-13 等以及高表达GATA3 转录因子[3]。不同于T 细胞，ILC2 无需特异性抗原激活，IL-33、IL-25、胸腺基质淋巴生成素（TSLP）以及二十烷酸类物质均可激活ILC2[4-6]。然而，不同组织器官中的ILC2 是否存在功能差异，以及对不同激活剂的反应性目前尚不清楚。本研究通过比较肠道和肺中ILC2 的表达差异，旨在更好理解不同组织中ILC2 的功能和特性。

1 材料与方法

1.1 实验材料 C57BL/6 小鼠，6～8 周，雌性，20～25 g（南京大学模式动物中心），饲养于SPF 级实验动物中心。各种细胞因子（R&D 公司），GSI（Calbiochem公司），RPMI 1640 培养基、胎牛血清、0.25%胰酶（Gibco 公司），细胞增殖用 EdU（Thermo Fisher 公司），RNeasy 试剂盒（QIAGEN），Reverse Transcrip tase superscript II 试剂盒（Invitrogen），Sybr green real-time PCR 试剂盒（宝生物公司），EdU 检测试剂盒（Thermo 公司）。培养用细胞因子 IL-2、IL-7 和 IL-25（Peprotec 公司），anti-B220（RA3-6B2）、anti-NK1.1（PK136）、anti-CD11b（M1/70）、anti-CD3（2C11）、anti-CD5（53-7.3）、anti-CD45.2（104）、anti-Thy1.2（53-2.1）、anti-CD25（PC61.5）、anti-T1/ST2（DJ8）和 anti-TCRβ（H57）（BioLegend 公司 或 Thermo 公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 流式细胞仪分选细胞：取1×108个肠或肺细胞放置于流式管中，用500 μL 流式缓冲液（含0.5%FBS 的 PBS）洗 2 遍，以 300 μL 流式缓冲液重悬细胞，加入相应抗体，轻轻混匀后4 ℃避光孵育30 min，500 μL 流式缓冲液洗 2 遍，上 FACSAria III 流式细胞仪进行细胞分选。以下标记细胞被认为是ILC2 细胞：B220（-）、NK1.1（-）、CD11b（-）、CD45.2（+）、CD3（+）和 T1/ST2（+）；在有些实验中 B220（-）、NK1.1（-）、CD11b（-）、CD45.2（+）、Thy1.2（+）或TCRβ（+）和 CD25（+）。

1.2.2 real-time PCR 检测细胞因子：取分选后的ILC2 细胞用RNeasy 试剂盒提取RNA，采用Reverse transcriptase superscript II 试剂盒合成cDNA，利用引物及Sybr green real-time PCR 试剂盒在LC480 real-time PCR 仪上进行细胞因子检测，以GAPDH为内参。……