马 锁， 丛 丽 娜， 谢 定 刚， 陈 清 平

( 大连工业大学 生物工程学院, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

溶菌酶又称胞壁质酶，在自然界中分布极为广泛，它主要通过破坏肽聚糖的支架，使细菌细胞壁肽聚糖中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1，4糖苷键水解，导致细胞裂解死亡，从而起到杀菌的作用[1]。溶菌酶广泛存在于高等动物器官组织、分泌物以及部分植物体内和微生物细胞内[2-4]，具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力等独特功效，被广泛应用于食品和医药等行业[5-6]。i-型溶菌酶仅存于无脊椎动物中，在无脊椎动物先天免疫中起着重要作用[7-8]。与蛋清c型溶菌酶不同，水产动物i-型溶菌酶具有更广泛的抗菌谱，即对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有明显的抗菌作用[9]。目前工业提取溶菌酶的方法繁多复杂，因此，探索出成熟的i-型溶菌酶分离提纯生产方法十分必要。

以本实验室已构建的能够高效表达海参i-型溶菌酶的毕赤酵母基因工程菌HS 3-1为出发菌株，利用5 L发酵罐进行发酵培养，并对发酵液进行分离纯化，制备出海参i-型溶菌酶；并对该溶菌酶进行pH、温度和热稳定性等理化性质及动力学模拟的初步研究。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 菌 株

毕赤酵母菌株为本实验室已构建的毕赤酵母基因工程菌HS 3-1；供试菌株为溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)均为本实验室保藏。

1.1.2 培养基

YPD培养基：酵母提取物1 g，胰蛋白胨2 g，加水定容至90 mL，121 ℃灭菌20 min，待冷却至50 ℃时，加入10 mL 10×葡萄糖。

BMGY培养基：酵母提取物1 g，胰蛋白胨2 g，加水定容至70 mL，121 ℃灭菌20 min，待使用时加入10 mL 10%甘油，10 mL 10×YNB(含硫酸铵的酵母基础氮源)以及10 mL磷酸盐缓冲液 (pH 6.0)。……