涂枫 赵为民 曹静

摘要：将黑曲霉属XynB基因和猪RELMβ基因核心启动子区克隆到pcDNA3.1（-）中，构建携带绿色荧光和Myc双标记的肠道特异表达载体pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP。利用脂质体介导将载体转染人结肠癌细胞（HT29）和人肝癌细胞（Bel7402），荧光显微镜检测发现，该载体可在HT29细胞特异表达绿色荧光蛋白;对转染该表达载体的HT29细胞进行RT-PCR检测和WB分析，结果表明，XynB基因在HT29细胞中正常转录，并且在细胞内检测到目的蛋白表达。

关键词：木聚糖酶;特异表达载体;抵抗素样β基因;WB检测;RT-PCR检测

中图分类号： Q786  文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2020）11-0053-04

收稿日期：2019-07-24

基金项目：国家自然科学基金（编号：31872338）;国家生猪现代产业技术体系项目（编号：CARS-35）;江苏省农业重大新品种创制项目（编号：PZCZ201733）。

作者简介：涂枫（1989—），男，江苏南京人，主要从事猪育种研究。E-mail：530538145@qq.com。

通信作者：陈哲，副研究员，主要从事畜禽繁殖和环境控制研究。E-mail：chenzzju@163.com。  木聚糖是含量仅次于纤维素的半纤维素多糖，作为玉米-豆粕型日粮中的主要抗营养因子，无法被单胃动物内源性消化酶独立消化[1]。木聚糖酶（xylanase B，XynB）可以破坏木聚糖的大分子结构，是水解木聚糖的关键酶。黑曲霉属的木聚糖酶具有良好的耐酸性，畜禽胃肠道温度和pH值对该木聚糖酶活性影响不明显，目前木聚糖酶被作为添加剂应用于畜禽和水产饲料生产[2]。考虑到外源性木聚糖酶降解效率和木聚糖存在的广泛性，利用转基因技术实现木聚糖酶在动物肠道内表达，为实现饲料中木聚糖的彻底降解提供可能。

抵抗素样β基因（resistin-like molecule β，RELMβ）是肠道免疫保护相关的重要候选基因，在近端和远端结肠特异性高表达[3]。……