邱 敏， 李晓红， 黄兹锐， 陈 景， 周成斌， 陈寄梅， 庄 建△

（1华南理工大学医学院，广东广州510641；2广东省人民医院，广东省心血管病研究所，广东省华南结构性心脏病重点实验室，广东广州510080）

吸烟会增加吸烟者罹患各种肿瘤和心血管疾病等的风险，同时孕期烟草或尼古丁的暴露对母体和胎儿的健康均有不良影响［1-2］。吸烟也是导致过早死亡的主要原因。尼古丁作为香烟中的一种关键化合物，除了上瘾外，它还可能导致各种不良的健康问题。大量的研究报道尼古丁对干细胞的增殖、分化、迁移等均有不同程度的影响［3-4］，且其机制与多种烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors，nAChRs）有关，尼古丁是这些受体重要的激动剂［5］。而干细胞中本身的以及尼古丁暴露后的nAChRs 的表达差异有待而进一步研究。本研究以4 种干细胞——人胚胎干细胞系H9、人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，IPSC）、人脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells，UCMSC）和人骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMMSC）为研究对象，观察尼古丁处理前后这些细胞上nAChRs 表达情况及变化，为探究尼古丁的作用机制提供理论基础。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 细胞 H9 细胞和IPSC（北京赛贝生物技术有限公司）；BMMSC（赛业生物科技有限公司）；UCMSC来自健康足月剖宫产胎儿脐带（已获得广东省人民医院伦理审批及产妇知情同意）。

1.2 试剂 尼古丁和胰酶（Sigma-Aldrich）；E8 人多潜能干细胞培养基和人多潜能干细胞消化液（含EDTA）均购自北京赛贝生物技术有限公司；DMEM/F12 和澳洲胎牛血清（Gibco）；Matrigel（BD）；青霉素和链霉素（华北制药公司）；RIPA 裂解液和PMSF 蛋白酶抑制剂（Solarbio）；TBST 缓冲液（上海生工生物工程股份有限公司）；……