俞 婷， 夏 珺， 赵 蕾

（重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室，重庆400016）

自噬是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程，是一种正常的生理现象［1］。自噬参与了各种疾病的发生发展，包括肿瘤、非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）等［2-3］。

白细胞分化抗原36（cluster of differentiation 36，CD36）是一种模式识别受体，能识别多种内源性和外源性有害物质，与多种疾病的发生发展密切相关［4］。既往研究表明，在肝细胞中过表达CD36 可以抑制自噬，下调CD36 的表达则可激活自噬［5］。我们课题组近期研究表明CD36 棕榈酰化修饰与其功能密切相关，CD36 棕榈酰化修饰能够改变其在细胞膜上的定位，增加细胞对游离脂肪酸的摄取，抑制脂肪酸β 氧化，导致细胞内脂质积聚和炎症，而CD36 棕榈酰化位点突变能减少CD36在细胞膜上的定位，降低细胞对脂肪酸的摄取，改善细胞内脂质积聚和炎症［6］。然而，目前尚不清楚CD36 棕榈酰化修饰在自噬中的作用。因此本研究拟通过构建CD36 棕榈酰化位点突变的HepG2细胞，探讨CD36棕榈酰化位点突变对HepG2细胞自噬的影响及其分子机制。

材 料 和 方 法

1 细胞

参照本实验室已发表文献［6］，构建过表达野生型CD36（WT-CD36）和棕榈酰化位点突变型CD36（AA-SS）的HepG2细胞。用PCI-CD36作为模板和突变引物，用多点定向诱变试剂盒（Quick Change ⅡXL，Agilent Technologies）生成 CD36 突变体。慢病毒构建体由上海基因化学公司提供，包括GV341 空载体（阴性对照，negative control，NC）、含WT-CD36的 GV341 载体（WT-CD36）及含 AA-SS 的 GV341 载体。按MOI=10来感染HepG2细胞，并用Sangon提供的嘌呤霉素筛选细胞，分别命名为NC-HepG2、WTCD36-HepG2和AA-SS-HepG2。

2 主要试剂

棕榈酸（palmitate acid，PA）和牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）购于Sigma；GFP-mRFP标记的微管相关蛋白1 轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）双荧光腺病毒购于上海吉凯基因化学技术有限公司；……