复旦大学附属肿瘤医院检验科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032

肾癌是泌尿系统的常见肿瘤之一，肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）占肾癌的70%～75%［1］。局限性ccRCC手术后尚无标准辅助治疗方案，同时转移性ccRCC无标准的治疗方案，通常采用以内科为主、外科手术为辅的综合治疗，因此寻求新的治疗手段迫在眉睫。谷氨酰胺（glutamine，Gln）是动物组织中重要的氮源。在肿瘤细胞中，Gln代谢处于高水平［2］，也会与宿主细胞竞争血液循环中的Gln，并引起Gln代谢重编程［3］。Gln代谢产生谷胱甘肽、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate，NADPH）等还原性物质抵抗细胞凋亡，抗氧化物质含量的变化会引起微环境的改变，进而影响ccRCC对铂类等细胞化疗药物的敏感性［4］，因此调控谷氨酰胺代谢可成为治疗ccRCC的新手段。

沉默信息调节因子4（silent information regulator 4，SIRT4）位于线粒体基质，调节多种代谢酶活性和参与氧化应激的过程［5］，可以通过ADP-核糖基化抑制谷氨酰胺脱氢酶活性［6］，抑制谷氨酰胺代谢，因此被认为是“glutamine gatekeeper”［7］。现有研究［8］表明，SIRT4作为一个抑癌基因参与肿瘤的发生过程。在人类癌症和小鼠肿瘤模型中发现SIRT4具有肿瘤抑制作用［9-10］。此外，在正常细胞中，DNA损伤时Gln代谢明显降低，通过控制周期停滞来限制危害，但是如果SIRT4缺失或低表达，这种保护性限制将会被打破，促进肿瘤的发生、发展［11］。虽然在SIRT4在肝癌［12］、非小细胞肺癌［13］等癌种中可抑制肿瘤进展，但SIRT4对ccRCC发生、发展的影响尚不清楚，本研究探讨SIRT4是否通过抑制谷氨酰胺代谢影响ccRCC增殖、凋亡。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系