杨爱婷，严旭禛，赵文姗，李为雨，陈 巍，尤 红

首都医科大学附属北京友谊医院 科研实验中心，北京市临床医学研究所，国家消化系统疾病临床医学研究中心，北京 100050

肝纤维化是以细胞外基质(ECM)过度沉积为特征的慢性肝脏疾病[1]。除胶原外，弹性蛋白已被证实在肝纤维化尤其在肝硬化阶段大量沉积[1-2]。成熟的弹性蛋白是一种不溶性非极性蛋白，由可溶性单体原弹力蛋白聚合而成[3]。原弹性蛋白分子富含丙氨酸和赖氨酸残基，它们是交联反应的主要位点。此外，在成熟的ECM中，分子间交联增加了弹性纤维的不溶性，使ECM不易被降解，进而限制了纤维化的可逆性。因此弹性蛋白在肝组织沉积可能是部分患者肝硬化无法逆转的原因[4]，但弹性蛋白在纤维化进展过程中的动态变化尚不清楚。本文旨在动态观察弹性蛋白在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型小鼠进展过程中的表达特点，进一步探寻影响弹性蛋白沉积的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用8周龄雄性C57B6/J小鼠[斯贝福，北京；生产许可证编号：SCXK(京)2014-0006；实验动物使用许可证编号：SCXK(京)2017-0019]，动物自由进食、饮水，标准饲料颗粒喂食，室温20 ℃～22 ℃，每12 h明暗循环。

1.2 试剂和仪器 反转录试剂盒(Promega公司)、ABI Power SYBR Green PCR Master Mix试剂盒(Applied Biosystems，USA)、弹性蛋白染液(贝索，珠海)、抗弹性蛋白(MAB2503；Millipore，USA)、抗Ⅰ型胶原(PA5-95137，Invitrogen，USA)，7500快速序列检测器(Applied Biosystems，USA)、Fastin ElastinTMAssay(Biocolor life science assays，UK)、SircolTMInsoluble Collagen Assay(Biocolor life science assays，UK)、LC-MS/MS-IT-TOF高效液质联用色谱仪(Shimadzu，Japan)。

1.3 实验方法

1.3.1 小鼠CCl4肝纤维化形成及自发逆转模型的建立将CCl4溶于橄榄油(CCl4和橄榄油按1∶7体积混合)，给予0.2 ml/100 g腹腔注射，2次/周，连续8周。纤维化进展期组分别于CCl4腹腔注射的第4周和8周末处死小鼠；……