（山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061）

免疫是防控动物疫病的重要措施，若免疫措施不到位或方法不准确，会导致免疫效果不佳或失败，从而引发动物疫病，造成严重经济损失[1]。鸭病毒性肝炎（duck virus hepatitis，DVH）是引起雏鸭高致死性的传染病，一直严重影响鸭养殖业发展。对于DVH，目前尚无有效的治疗药物，免疫接种是最有效的预防措施之一。目前DVH 免疫有多种途径，而不同接种途径对DVH 抗体的影响研究报道较少。本研究对DVH 弱毒活疫苗3种接种途径（肌注、饮水、滴口）进行试验，对比不同接种途径对枫叶雏鸭DVH 抗体的影响及保护率，以期为鸭场免疫途径的选择提供参考。

1 材料

1.1 试验动物

非免疫种鸭所产的1 日龄体质量均等的健康枫叶雏鸭360 只（试验A 组），规范免疫种鸭所产的1 日龄体质量均等的健康枫叶雏鸭360 只（试验B 组）：均购自山东永惠枫叶种鸭有限公司，按照常规饲养至5 日龄进行试验。

1.2 试验试剂

DVH 弱毒活疫苗（CH60 株），由哈药集团生物疫苗有限公司生产；DVH 抗体（DVh-Ab）ELISA检测试剂盒，由上海泛柯实业有限公司生产；鸭肝炎病毒AV211 株，购自中国兽药监察所。

2 方法

2.1 试验分组及免疫方案

2.1.1 试验分组 将试验A 组的360 只雏鸭随机分为4 组，分别为饮水A 组、滴口A 组、肌注A 组、对照A 组（不免疫），每组90 只；将试验B 组的360 只雏鸭也随机分为4 组，分别为饮水B 组、滴口B 组、肌注B 组、母源抗体监测组，每组90 只。母源抗体监测组，分别在雏鸭1、3、5 日龄时测定母源抗体效价，其他试验组均在5 日龄时进行试验。

2.1.2 免疫方案 饮水组：免疫前2 h，给雏鸭停水，使其处于饥渴状态，然后按照使用说明书，将DVH 弱毒苗用干净的井水稀释，同时混合均匀。每只雏鸭饮用1 mL 的疫苗量，直至饮完。饮用后为避免疫苗在体内被稀释，继续停水1～2 h。滴口组：按照说明书，将DVH 弱毒苗稀释混匀，进行滴口免疫，保证每只雏鸭疫苗量为1 mL。肌注组：按照说明书，在雏鸭腿部肌肉注射DVH 弱毒苗1 mL/只。

2.2 抗体水平检测和攻毒保护试验

2.2.1 试验A 组 雏鸭免疫后常规饲喂。各组在免疫后5、10、15 d，分别随机各取30 只雏鸭进行心脏采血，用ELISA 方法检测免疫后的抗体效价，计算平均值，同时注射DVH 病毒0.1 mL/只进行攻毒试验。观察至免疫后20 d，记录每组雏鸭发病死亡情况。出现精神沉郁，呈昏睡状，或者出现共济失调症状，判定感染发病；出现上述症状后死亡，判定为感染死亡[2]。

2.2.2 试验B 组 除母源抗体监测组外，其他各组试验方法同A 组对应一致。母源抗体监测组在1、3、5 日龄时，各抽取30 只雏鸭检测抗体。

3 结果与分析

3.1 试验A 组

结果（表1）显示：不同免疫途径对雏鸭抗体效价有影响，对应的攻毒保护率也有所不同，平均抗体效价和攻毒保护率从高到低依次为肌注组、滴口组、饮水组，免疫15 d 后的攻毒保护率均到达93%以上，达到了理想的保护效果。而对照组没有检测到抗体，效价为0，表明试验结果成立。

表1 A 组雏鸭抗体水平测定和攻毒试验结果

3.2 试验B 组

母源抗体监测组结果（表2）显示，免疫种鸭所产的5 日龄以内雏鸭母源抗体水平较高，且随日龄增长，母源抗体呈下降趋势，与抗体消长规律相符合。其他试验组结果（表3）显示：经不同途径免疫后，存在母源抗体的雏鸭抗体效价和对应的攻毒保护率都慢慢升高，平均抗体效价和攻毒保护率从高到低依次为肌注组、滴口组、饮水组，但对应的抗体效价和攻毒保护率均低于试验A 组，表明母源抗体对疫苗免疫抗体产生了一定的干扰。

4 讨论

通过试验数据对比发现，虽然母源抗体对疫苗免疫后抗体的产生有一定的干扰，但疫苗免疫后的抗体水平仍直线升高，说明该疫苗的保护效果较好，与丛秋实等[3]的研究结果一致。无论有无母源抗体干扰，用DVH 弱毒活疫苗（CH60 株）免疫的最佳接种途径为肌内注射，其次是滴口，饮水免疫效果较差，但免疫15 d 后都能达到良好的攻毒保护效果。

表2 母源抗体监测组雏鸭抗体监测结果

表3 B 组雏鸭抗体水平测定和攻毒试验结果

DVH 是一种传播迅速，可造成雏鸭高发病率和死亡率的病毒病，在自然感染情况下，只有雏鸭会发病，主要是20 日龄以内，尤其3～10 日龄的雏鸭[4]。目前，常通过以下两种方法[5]预防DVH：一是免疫种鸭，使雏鸭获得母源抗体而受保护；二是直接免疫雏鸭，使雏鸭主动产生抗体。本试验主要对免疫雏鸭的方法进行探讨，对于哪种方法保护效果最好，有待下一步研究。由于20 日龄之后，雏鸭对DVH 病毒的易感性会随之降低[6]，所以本试验只做了免疫后20 d 内的研究。

临床上一般采用注射免疫，有些疫苗可通过滴口和饮水方式免疫。程安春等[7]对饮水、皮下注射、滴鼻和喷雾等多种免疫途径进行了研究。而对肌内注射、饮水、滴口3种免疫途径效果是否有差异少有报道。本试验对比3种接种途径对枫叶雏鸭DVH 抗体的影响及保护率差异，为鸭场免疫途径选择提供了依据。Hanson[8]用致弱的DVH 疫苗肌内注射接种，发现免疫效果较好。Hwang[9]用DVH 弱毒肌内注射雏麻鸭，3 d 后即产生较强的免疫力，而口服免疫6 d 后才可产生免疫保护，与本试验结果基本一致。

有研究[10]表明，种鸭严格按免疫程序免疫后所产的健康雏鸭，其母源抗体能保护雏鸭预防DVH 病毒的早期感染。体内存在母源抗体的雏鸭，经DVH 弱毒疫苗免疫后，免疫效果确实受影响，且母源抗体量越高，产生的疫苗免疫抗体水平就越低，但随着母源抗体的减少，免疫抗体水平逐渐增强，这与本试验结果一致。

因此鸭场在制定种鸭或雏鸭免疫程序前，必须根据本场使用疫苗的种类和养殖场实际情况，选择最有效、最合适的免疫途径，同时还应注意疫苗免疫后产生有效抗体时间，以及雏鸭体内的母源抗体情况[11]，避免与疫苗相互干扰。另外，如果雏鸭孵出后感染了DVH 病毒，那么即使采取了免疫措施，免疫效果也会受到影响，因此除了加强免疫接种外，还应严格控制鸭苗的引进[12]，加强饲养管理，完善卫生消毒制度[13]。

5 结论

研究表明：不同接种途径对枫叶鸭DVH 抗体产生确实有影响，肌内注射免疫效果最佳，其次是滴口，饮水效果相对偏低，但免疫15 d 后都能产生良好的保护效果，因此各场需根据使用的疫苗种类和实际情况，选择最合适、最有效的免疫途径；母源抗体可干扰疫苗的免疫效果，因此疫苗免疫时需做好母源抗体监测，以选择最佳免疫时间。