尹静，唐芳，袁寒梅，史育红(成都医学院第二附属医院·核工业四一六医院核医学科, 成都 610051)

游离甲状腺素(free thyroxine，FT4)目前多采用化学发光法检测，易受到生物素、甲状腺激素自身抗体(thyroid hormone autoantibodies，THAAb)、异嗜性抗体等的干扰，引起假阳性结果[1-2]。我们发现采用直接化学发光法多次检测1例患者的甲状腺功能，FT4均异常增高，排除生物素和异嗜性抗体的干扰后，通过聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)对标本沉淀处理，FT4水平下降，更符合患者的促甲状腺素(thyroid stimulating hormone，TSH)变化和临床表现。现报道如下。

1 病历摘要

患者女，19岁，2019年1月17日因“发现颈部包块伴甲状腺功能异常5余年”入院。患者5年前发现颈部包块，诊断为甲状腺功能亢进，予以甲巯咪唑治疗。2017年10月10日，因甲状腺肿伴甲状腺结节在超声引导下行双侧甲状腺结节射频消融手术，术后继续给予甲巯咪唑治疗。

此次入院甲状腺功能及抗体结果：三碘甲腺原氨酸(T3)：2.56 nmol/L，甲状腺素(T4)：52.80 nmol/L，游离T3(FT3)：6.59 pmol/L，FT4：73.96 pmol/L，TSH：1.245 mIU/mL。甲状腺球蛋白：>500 ng/mL(参考值：3.50～77.00 ng/mL)，甲状腺球蛋白抗体：1 049.00 IU/mL(参考值：0.00～115.00 IU/mL)﹑甲状腺过氧化物酶抗体：544.10 IU/mL(参考值：0.00～34.00 IU/mL)。甲状腺CT示：甲状腺弥漫性肿大，其内多发结节，性质不明确，气管受压变窄。2019年1月28日在全麻下行双侧甲状腺近全切除术+双侧喉返神经探查术。术后病理示：良性结节。

2 实验室检查

患者多次于我科检测甲状腺功能，检测结果见表1。观察发现该患者血浆FT4均明显升高，其升高与T4、TSH的变化不相符，与临床表现也不相符，遂开展实验研究。

表1 患者甲状腺手术前、后甲状腺功能检测结果

2.1仪器与试剂 ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫测定仪及配套游离甲状腺素直接化学发光竞争性免疫分析法测定试剂盒(德国Siemens公司)。Cobas e 601全自动电化学分析仪及配套FT4电化学发光法试剂盒(美国Roche公司)。PEG-6000(天津市致远化学试剂公司)，HBR-PLUS、HBR-11(Scantibodies Laboratory公司)。

2.2方法与结果

2.2.1不同方法学检测结果比较 取1月26日患者空腹抽取的静脉血5 mL于肝素抗凝管,3 500 r/min离心5 min分离血浆后，在ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫测定仪上进行检测，试剂为配套的游离甲状腺素试剂盒，检测方法为直接化学发光法。剩余血浆分装成2份冻存。1份送Cobas e 601全自动电化学分析仪上进行检测，使用配套FT4试剂盒，检测方法为电化学发光法。均按照仪器和试剂说明书进行检测。直接化学法和电化学发光法检测T3、T4、FT3和TSH浓度的结果非常相近，而FT4的结果相差很大，分别为60.28 pmol/L、6.83 pmol/L。见表2。

表2 直接化学法和电化学发光法检测甲状腺功能结果比较

2.2.2抗异嗜性抗体和PEG处理血浆后FT4检测 取冻存的另一份患者血浆复溶，分别加入2种抗异嗜性抗体(HBR-PLUS阻断剂和HBR-11阻断剂)以阻断异嗜性抗体，20% PEG-6000沉淀剂处理患者血浆(可去除THAAb)，混匀，4 ℃过夜，离心取上清液再次用直接化学发光法检测FT4，具体处理方法及检测结果见表3。单独加抗异嗜性抗体与对照组之间无显著差异，排除异嗜性抗体的干扰作用。PEG组与对照组相比，FT4明显降低，由78.44 pmol/L降至18.32 pmol/L。

表3 PEG-6000沉淀剂、HBR-PLUS阻断剂和HBR-11阻断剂处理对FT4结果的影响

3 讨论

该患者多次于我科检测甲状腺功能，FT4均明显增高，不随其他激素(T3、TF3、T4、TSH)的变化而变化，与临床表现不符，考虑为异常增高。FT4属于极微量激素，对检测方法的灵敏度要求高，过去常采用放射免疫法，目前多为化学发光法。本实验室使用的西门子ADVIA CentaurXP检测原理为直接化学发光竞争性免疫分析，简单、快速、灵敏度高，但由于采用一步法，检测试剂直接与血浆接触反应，很容易受到血浆中其他物质的干扰[3]。发现患者FT4多次异常增高后，我们首先考虑是否为检测方法导致FT4异常增高，因此更换检测方法，改用电化学发光法在Cobas e 601上进行检测，结果FT4水平明显降低，与临床表现更加相符。直接化学发光法和电化学发光法之间的主要差异为标记抗体不同，与固相载体结合能力具有一定差异，导致内源性的结合蛋白的亲和力不同，这可能会导致FT4检测结果差异。文献报道血浆中存在的生物素、THAAb、异嗜性抗体等均可能会对FT4的检测造成干扰，引起假阳性结果。当待测样本中存在高浓度游离生物素时，可与链霉亲合素结合，阻止部分抗原抗体复合物中生物素化抗原与链霉亲合素结合，造成游离信号增强，导致FT3、FT4结果假性增高[2]。经详细询问病史，该患者并未服用含生物素的药物或保健品。另外，2种仪器均使用含生物素的试剂，不会只影响ADVIA Centaur XP而不影响Cobas e 601，也不会只影响FT4的检测而不影响FT3、TSH的检测，因此排除生物素的影响。异嗜性抗体是一类免疫球蛋白，临床使用的免疫试剂抗体多来源于实验动物，而异嗜性抗体可与多种动物Ig的Fc和Fab表位非特异性结合从而干扰测定结果，已有文献报道HA可影响FT3、FT4、TSH等的检测[4]。为判断该患者血浆是否存在异嗜性抗体的干扰，我们分别用2种抗异嗜性抗体(HBR-PLUS阻断剂和HBR-11阻断剂)处理血浆后再次在ADVIA Centaur XP上进行检测，抗异嗜性抗体组与对照组之间没有明显变化，排除异嗜性抗体的影响。有文献报道，影响FT4异常增高的内源性结合蛋白主要考虑为甲状腺素自身抗体的干扰[5]。当THAAb存在时，示踪剂标记的T4与样品中的THAAb异常结合，示踪剂标记的T4与检测的标记抗体结合减少，由于采用竞争法，所以检测出样本FT4增多，结果假性增高。THAAb虽然在普通人群中并不常见，但在甲状腺疾病和非甲状腺相关的自身免疫病患者体内其浓度会明显增高，尤其在桥本甲状腺炎患者体内可高达40%[6]。目前并无可特异性阻断THAAb的相关试剂，无法直接通过抗体去除THAAb的影响。THAAb多属于IgG亚型，PEG是一种常用的分离剂，已有文献报道PEG的沉淀作用可以除去血浆中的THAAb[7]。我们用20%的PEG沉淀血浆后再次在ADVIA Centaur XP上检测，FT4水平明显下降，与其他激素水平和临床表现更加相符。这证实患者血浆中存在干扰物质会对直接化学发光法检测造成干扰，可以通过PEG沉淀处理除去这种干扰。临床医生与检验工作者如果不了解FT4检测的干扰因素，不能正确对标本进行前处理，将会得到假阳性结果，导致误判、误诊，耽误病情，甚至不适当的治疗。因此，临床工作中如遇结果异常增高且与临床症状不符的，应该考虑是否存在干扰因素。

在临床检测中，血浆成分复杂，个体差异大，当出现异常结果时，我们并不能快速明确哪些物质可能会对检测造成影响，也可能无法特异性地去除某种物质的干扰。排除其他常见原因后，可以通过PEG对血浆进行沉淀处理后再次检测，避免误诊。PEG为一种非特异性沉淀剂，经济实惠，可简单、快速沉淀多种大分子物质，如去除THAAb、脂质等对检测的干扰，应在临床普遍推广[7]。