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下调miR-217抑制类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞炎症反应的实验研究

2020-05-21郭淑芳姜婷婷延安大学医学院延安716000

中国免疫学杂志 2020年8期
关键词:检测

郭淑芳 姜婷婷 (延安大学医学院,延安 716000)

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA) 是一种临床常见的自身免疫性疾病,主要特征为关节慢性滑膜炎症[1]。RA患者在发病后两年内即可出现不可逆的关节损害,严重影响患者的生活质量[2]。单核/巨噬细胞是RA滑膜组织以及关节液中数量最多的免疫细胞,通过分泌活性因子、抗原提呈等调节免疫功能[3]。单核/巨噬细胞过度活化导致滑膜慢性炎症,其还能分泌TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子,加剧炎症反应,促进RA患者病情的恶化[4]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的非编码小分子单链RNA,长度为18~25个核苷酸,在炎症反应、固有免疫以及肿瘤发生和发展等生物学过程中起重要的调节作用[5-7]。研究显示,miR-217在乙醇诱导的肝细胞中表达上调,下调miR-217表达可抑制乙醇诱导的肝脏炎症[8]。miR-217在高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMC)中表达上调,miR-217基因沉默可抑制高糖培养的大鼠RMC细胞炎症反应和纤维化[9]。目前,miR-217对RA患者PBMC细胞炎症反应的影响还未见报道。本研究分离培养RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导PBMC细胞产生炎症反应,探讨miR-217对RA患者PBMC细胞炎症反应影响及其作用机制,为RA的临床治疗提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1材料 人AB血清购自上海素尔生物科技有限公司;DMEM培养基购自美国Gibco公司;TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10试剂盒购自南京建成生物工程研究所;Trizol试剂和反转录试剂盒购自美国Invitrogen公司;PCR试剂盒购自TaKaRa公司;引物序列由上海生物工程公司设计提供;RIPA蛋白裂解液和BCA蛋白测定试剂盒购自碧云天公司;转染相关miR-217阴性对照、miR-217 mimics等均购自Ambion公司;……

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