郝吉庆,程浩,高薇薇,孙翠兰

(安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科, 安徽 合肥 230022)

肺癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC))占85%。NSCLC主要包括肺腺癌和鳞癌，其5年生存率大约为15%[1]。多西他赛属于微管解聚抑制剂，是NSCLC患者的标准二线化疗药物[2]。纤维蛋白原样蛋白1(fibrinogen-like protein 1，FGL1)是肝脏分泌的一种可促进细胞有丝分裂的特异生长因子，且在正常肝组织、肿瘤细胞和组织内呈过表达状态[3-4]。生理条件下，FGL1主要以自分泌的形式促进细胞有丝分裂增殖[5]。目前，有关FGL1与多西他赛等药物敏感性的研究较少。本研究旨在探讨FGL1在人肺腺癌细胞株PC-9中的表达情况及其对肺癌细胞多西他赛敏感性的影响，为提高多西他赛的临床疗效提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞株 人正常肺上皮细胞BEAS-2B及人肺腺癌PC9细胞均购自中国科学院上海细胞库。

1.1.2药物与试剂 多西他赛购于北京索莱宝有限公司(货号ID0400)，胎牛血清购自Gibco(货号10270106)，RPMI培养基购自Hylcone(货号SH30022.02)，CCK-8 试剂盒购自北京索莱宝科技公司(货号CA12110)、二喹啉甲酸(Bicinchoninicacid，BCA)试剂盒均购自Beyotime(货号P0010S);实时荧光定量试剂盒TBGreen购自日本 TaKaRa公司(货号RR820A),β-actin抗体购自Proteintech公司(货号60008-1-lg)，FGL1 抗体购自Abcam公司(货号ab197357),FGL1-siRNA重组序列、随机阴性对照序列由上海吉凯基因技术有限公司设计及合成。FGL1靶点序列GAPDH序列见Tab 1。

Tab 1 The primer sequence of FGL1 and GAPDH

1.1.3仪器 超净工作台(苏州净化设备厂)，恒温水浴箱(北京医疗设备厂)，低温高速离心机(德国Heraeus 公司)，普通离心机(德国Heraeus 公司400e型)，电泳仪(美国Bio-rad公司)，酶标仪(美国Bio-rad公司),纯水器(美国 Millipore 公司)。

1.2 方法

1.2.1细胞培养 人正常肺上皮BEAS-2B细胞和人肺腺癌PC-9细胞分别在含有10%胎牛血清的DMEM培养基和RPIM培养基中，置于 37 ℃、5% CO2饱和湿度条件下培养。……