张羽翀 王梦阳 林慧娇 张馨芸 王春梅 孙靖辉 李贺 陈建光 刘佳乐

(1北华大学药学院药理教研室，吉林 吉林 132013；2吉林市中心医院)

五味子是中国传统中药，为木兰科植物五味子的干燥成熟果实〔1，2〕。五味子木脂素(SCL)是五味子主要活性成分之一。本研究前期工作发现，SCL具有镇静和催眠的作用，该作用与其升高小鼠体内γ-氨基丁酸(GABA)和降低谷氨酸(Glu)水平有关〔3，4〕。研究表明，参与失眠和催眠的中枢神经递质除了GABA以外，5-羟色胺(HT)在调节睡眠中也起到了重要作用〔5，6〕。氯苯丙氨酸(PCPA)可拮抗5-HT前体(HTP)脱羧所依赖的色氨酸氢化酶，通过抑制5-HTP脱羧来阻断5-HT的合成可使慢波睡眠减少，昼夜节律消失，引起失眠的发生〔7，8〕。所以本文以5-HT为靶点，观察SCL对PCPA诱导的失眠大鼠的影响，进一步明确SCL的催眠作用及相关机制。

1 材料和方法

1.1实验试剂 SCL(北华大学五味子开发及产业化工程研究中心)；PCPA(Sigma)；5-HT、5-羟吲哚乙酸(HIAA)ELISA试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)。

1.2实验动物 雄性Wistar大鼠，体重(200±10)g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，许可证号SCXK(吉)-2016-0003。分笼后放于安静、温湿度适宜、通风良好的环境中，自由饮水，摄食，适应所处环境7 d后开始实验。

1.3主要仪器设备 LD5-10B高速离心机(北京市离心机厂)；生化培养箱(BSP-250)(上海市博迅公司)；全自动酶标仪(瑞士TECAN集团公司)；FSH-2型高速匀浆机(江苏省金坛亿通电子)。

1.4动物分组及给药

1.4.1失眠模型复制方法 大鼠适应性饲养1 w后，腹腔注射PCPA(300 mg/kg)，1次/d，连续3 d。动物出现昼夜节律消失，白天也活动不停，表明模型复制成功。

1.4.2实验分组 雄性Wistar大鼠，随机分组：空白对照组(CON组)，模型组(MOD组)，SCL组，PCPA+SCL组，每组6只。CON组及模型组给予相同容积蒸馏水，PCPA+SCL组及SCL组灌胃给予100 mg SCL，每天1次，连续给药7 d。CON组和SCL组腹腔注射相应容积生理盐水，MOD组和PCPA+SCL组于SCL给药第5天开始腹腔注射300 mg/kg PCPA，每天1次，连续给药3 d。

1.4.3SCL协同戊巴比妥钠睡眠实验 于末次给药40 min后，腹腔注射给予戊巴比妥钠(28 mg/kg和35 mg/kg)，此为阈下和阈剂量。观察时间为30 min，以实验大鼠翻正反射消失1 min以上为阳性指标。记录各组大鼠的睡眠只数、睡眠潜伏期及睡眠持续时间。

1.4.4大鼠下丘脑组织中5-HT、5-HIAA水平检测 于末次给药40 min后，乙醚麻醉后迅速在冰垫上分离出下丘脑，取组织上清液进行相应的5-HT、5-HIAA水平的检测(参照说明书)。

1.5统计学处理 采用SPSS9.0软件进行单因素方差分析及t及χ2检验。

2 结 果

2.1SCL协同阈下剂量戊巴比妥钠对大鼠睡眠只数的影响 与CON组比较(1只)，MOD组大鼠睡眠只数(0只)减少，SCL组大鼠睡眠只数(6只)增加；与MOD组相比，PCPA+SCL组大鼠睡眠只数(4只)增加，提示SCL能够协同戊巴比妥钠增加失眠大鼠的睡眠只数。

2.2SCL协同阈剂量戊巴比妥钠对大鼠睡眠的影响 与CON组比较，MOD组大鼠睡眠潜伏期显著升高，睡眠时间明显缩短(P<0.05，P<0.01)，SCL组大鼠睡眠潜伏期明显缩短并且睡眠时间显著延长(P<0.01或P<0.05)，与MOD组相比，PCPA+SCL组大鼠睡眠潜伏期明显缩短，睡眠时间显著延长(P<0.05)，提示SCL能够协同戊巴比妥钠对抗PCPA所致的大鼠失眠。见表1。

表1 SCL协同阈剂量戊巴比妥钠对各组大鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响

与CON组比较:1)P<0.05，2)P<0.01；与MOD组比较:3)P<0.05，4)P<0.01；下表同

2.3SCL对失眠大鼠下丘脑中5-HT和5-HIAA水平的影响 见表2。

表2 SCL对各组大鼠下丘脑中5-HT和5-HIAA水平的影响

与CON组比较，MOD组大鼠下丘脑中5-HT和5-HIAA水平显著降低(P<0.01)，SCL组大鼠下丘脑中5-HT和5-HIAA水平升高(P<0.05)。与MOD组相比，PCPA+SCL组大鼠下丘脑中5-HT和5-HIAA水平升高(P<0.01)。提示SCL可能通过调节下丘脑5-HT和5-HIAA水平而发挥催眠作用。

3 讨 论

戊巴比妥钠阈剂量及阈下剂量睡眠试验是评价药物催眠功效的经典方法〔9，10〕。本实研究通过采取戊巴比妥钠阈下剂量及阈剂量协同睡眠试验，观察并记录大鼠的睡眠只数、睡眠潜伏期、睡眠持续时间，从而明确SCL的催眠作用。早在1968年Jouvet〔11〕就提出了5-HT致眠学说，降低脑内5-HT会引起失眠，而失眠的恢复同脑内5-HT水平的恢复呈正相关〔12，13〕。PCPA以阻断5-HT的合成为靶点，是目前公认的诱导失眠动物模型工具药〔14，15〕。与上述报道一致，本研究提示SCL能够改善PCPA诱导的大鼠的失眠。5-HT神经元通过上行投射影响下丘脑高级中枢，下丘脑中5-HT是参与睡眠-觉醒调节的重要组成部分〔16，17〕。5-HIAA是5-HT的代谢产物，脑内的5-HT在单胺氧化酶作用下脱胺生成5-羟吲哚乙醛，5-羟吲哚乙醛再经醛脱氢酶催化生成5-HIAA，因此脑内5-HIAA能反映5-HT能神经系统的活跃程度〔9，18〕。本研究提示SCL的催眠作用与5-HT有关。综上，SCL对PCPA所致失眠大鼠具有催眠作用，该作用与其调节大鼠下丘脑组织中5-HT水平有关。