张磊 陈大明 冯福梅 吴岭

(天津市宝坻区人民医院胃肠外科，天津 301800)

胃癌病发机制与地域存在一定相关性。肿瘤疾病在早期分级中为1期的患者生存率明显高于晚期患者，早期采取科学有效的治疗方法可有效提高患者预后，改善生存率，但临床中早期肿瘤无明显症状，且容易误诊，因此临床中多应用病理诊断〔1,2〕。遗传基因与肿瘤因子存在正相关性，但对胃癌肿瘤的发病机制及食管癌等疾病的相关研究显示，患者肝脏中的(ALDH)参与了酒精氧化代谢。发现ALDH2促进乙醇转化为乙醛，然后形成乙醛脱氢酶转变为无害醋酸〔3〕。乙醛属于严重致癌物质，是导致ALDH2失去活性转为乙醛，引发癌症的易感基因。本文采用DNA基因芯片高通量检测ALDH2基因多态性与患者生活习惯及胃癌易感基因的相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2017年8月至2018年8月在天津市宝坻区人民医院胃肠外科进行治疗的胃癌患者161例，均按照WS316-2010胃癌诊断标准进行；其中男87例，女74例，年龄56～63岁，平均(60.12±2.20)岁。采集纳入者2 ml静脉血，并应用TIA血DNA试剂盒提取DNA基因。

1.2方法 ALDH2基因多态采用焦磷酸进行测序检测，取15 μl PCR产物加入含有3 μl结合的抗生物素蛋白链球菌磁珠中和37 μl结合缓冲液〔含10 mmol/L Tris碱、2 mol/L NaCl、1 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)与0.81 mmol/L Tween-20〕；置于96孔PCR板中进行震荡孵育10 min(振速2 000 r/min)；将4个样品板分别滴入180 ml高纯度水，0.56×103g/L乙醇、变性缓冲液和120 ml洗涤缓冲液。将Vacuum Prep tool加入真空泵中，在高纯度水中洗30 s后放置PCR板中吸取磁珠，然后依次在0.56×103g/L乙醇及变性缓冲液、120 ml洗涤缓冲液中清洗5、8、10 s后将Vacuum Prep tool加入孔中预热25 μl 退火缓冲液和2 μl测序物的PSQ96板中，轻微摩擦后加热2 min，温度80℃后再次进行冷却。在试剂盒中加入荧光物和酶混合物进行检测。

1.3检测指标 经高通量测序对ALDH2基因多态性检测其结果与生活习惯统计数据及胃癌易感性应用在早期诊断中的疗效及两者在临床中的相关性。

1.4统计学方法 采用SPSS12.0软件进行χ2检验、Logistic回归分析。

2 结 果

2.1ALDH2经焦磷酸检测结果 焦磷酸测序采用Taq Man PCR进行了随机样品验证，结果显示本研究与Taq Man PCR数据完全相同；本研究建立的测序方法安全可信，且灵敏度及特异度均达100%。ALDH2属于不同基因型多态。A：ALDH2*1/1*GG野生型；B:ALDH2*1/*2GA为突变合子型；C：ALDH2*2/*2AA。结果是通过反测序法进行检测，得到的检测基因型为GG、GA、AA。见图1。

图1 ALDH2基因采用焦磷酸检测方法测序

2.2入院前5年存在高发胃癌的危险因素 男性吸烟者显著多于女性(P<0.05)，饮酒、热食、速食、暴食生活习惯方面男女比例相差不多，喜好腌制与辛辣食物女性比例显著多于男性(P<0.05)，见表1。

表1 入院前5年内存在高发胃癌生活习惯比较〔n(%)〕

2.3ALDH2基因多态性遗传平衡性检验结果 所有患者GG、GA、AA基因多态性比对差异无统计学意义(χ2=0.412，P=0.826)，男女患者对比差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 ALDH2基因多态性遗传平衡性检验结果〔n(%)〕

2.4ALDH2基因多态性检测结果和不良生活习惯评分对胃癌症状的多因素分析 基因型、等位基因的分布差异及不良生活习惯为胃癌症状的影响因素(P<0.05)，见表3。

3 讨 论

临床研究显示，引发胃癌的相关因素中不良嗜好与地域性均是导致胃癌发病率的主要因素〔4，5〕。我国因日常生活习惯引发胃癌的地区有山东、内蒙古及青海等，但因地域性引发胃癌的研究无确切的基因检测方法证明不良日常生活是造成胃癌高发的主要原因〔6，7〕。本研究发现，胃癌患者中的ALDH2基因与肝脏中的酒精氧化代谢酶存在相同性。焦磷酸测序应用于基因检测可快速获得DNA每段序列数据，且检测速度较快，此测序方法可直接进行高通量检测〔8，9〕。

本研究表明，胃癌患者体内确实存在ALDH2基因多态，且GG基因型分布较AA及GA多。等位基因分布中属G等位基因较为明显。本研究还显示，热食、暴食、吸烟、饮酒及喜好辛辣和腌制食物等是引发胃癌的主要危险因素。ALDH2位于染色体12q24.2，主要是促进肝脏代谢的一种酶，当ALDH2突变时，酒精被人体消耗促使体内乙醛浓度升高，导致心跳加速和恶心等症状〔5，10〕。有研究表明，ALDH2基因在日本人群中的频率为20.36%，中国为41.50%〔5〕。经焦磷酸检测胃癌患者DNA显示ALDH2基因多态的分布与胃癌易感性和不良生活存在正相关性，且易感性可能因ALDH2和不良的生活习惯造成胃癌患者易感性差〔5，11，12〕。

综上，ALDH2可有效作为胃癌检测的主要标志物，且早期胃癌诊断应用ALDH2基因多态性可明显观察到患者胃癌易感性和不良生活导致的ADLH2突变。焦磷酸测序法可快速准确评估ALDH2的基因状态，对胃癌患者的日常生活质量提供了有效保障。