海藻糖快速检测方法的建立与初步应用
2020-01-13苗佳王彩喆牛丹丹NokuthulaPeaceMchunu田康明SurenSinghKugenthirenPermaul王正祥
苗佳,王彩喆,牛丹丹,Nokuthula Peace Mchunu,田康明*,Suren Singh,Kugenthiren Permaul,王正祥*
1(天津科技大学 生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室,天津 300457) 2(天津科技大学 化工与材料学院,天津 300457) 3(Biotechnology Platform, Agricultural Research Council, Pretoria 0001, South Africa) 4(Department of Biotechnology & Food Technology, Durban University of Technology, Durban 4001, South Africa)
海藻糖(Trehalose, α-D-glucopyranosyl-α- D-glucopyranoside)是由两个葡萄糖残基组成的非还原性二糖,天然存在于低等植物、细菌、真菌、昆虫及无脊椎动物中[1-3]。在冷冻、干燥、加热等逆性环境下,海藻糖被认为能够与生物大分子形成氢键或在其周围形成玻璃质,从而起到保护作用,是新型食品加工与保鲜的重要保护剂[4-5]。海藻糖在保存脂类、蛋白质等生物大分子以及干细胞、组织和器官等方面的应用,也受到研究者的关注[6]。
海藻糖的定量分析是对其进行研究和应用的技术基础。目前常用的海藻糖定量分析方法包括比色法、高效液相色谱(HPLC)法和酶法。比色法是基于蒽酮与碳水化合物的颜色反应进行定量,不具有特异性[7-8]。HPLC法是目前定量分析海藻糖的主要方法,但其对样品处理要求较高,且受特定设备条件限制[9-14]。酶法检测利用海藻糖酶特异性水解海藻糖生成两分子葡萄糖,通过对反应过程参数[12]或对其酶解产物葡萄糖的检测[13, 15-18]而间接定量海藻糖,是亟待发展的海藻糖快速简便检测方法。
ANTONLLI等[14 ]使用海藻糖酶、己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,通过检测NADPH生成量间接定量海藻糖,检测限可达6.3 μmol/L;NEVES等[16]使用海藻糖酶、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶,依据染料吸光度变化测定生成的O2,以此定量海藻糖检测限可达50 μmol/L。此类方法特异性高,操作相对简便,但较高的用酶成本限制其推广应用。……
