刘 力 罗茜茜 张敬蕊 普晓瑜

(石家庄市第四医院检验科，石家庄050000)

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是胎儿宫内感染最常见的病毒，一般只引起亚临床感染和潜伏感染。当孕妇患有巨细胞活动感染时，病毒可通过胎盘进入胎儿体内引起先天性感染。孕妇原发感染引起宫内感染的几率为24%～75%，非原发感染引起宫内感染的几率为0.15%～2.0%[1]。发生宫内感染的胎儿10%～15%出生有症状，多数可出现发育迟缓、 肝脾肿大、小头畸形、脉络膜视网膜炎、血小板减少、贫血等症状，特别引起婴儿的巨细胞包涵体病，患儿可多个系统多个器官受损。85%～90%出生无症状，但约10%～15%可能发生迟发性神经耳聋，精神运动疾病等[2,3]。一般选择HCMV特异性IgM和IgG抗体联合应用来诊断是否感染及感染类型。本实验应用新型HCMV-IgG亲和力ELISA解离法检测试剂盒，开展HCMV-IgG亲和力检测，必将为感染诊断提供更加有力的帮助。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1一般资料 选择2016年1月～2017年11月在我院行巨细胞病毒感染筛查，结果为血清IgM抗体和IgG抗体双阳性的孕妇130例，无典型的感染症状，平均年龄(26.7±6.5)岁，其中8～16周孕妇123例，20周后的孕妇7例。入组孕妇空腹采集促凝血4 ml，离心分离血清备用。本实验经石家庄第四医院医学伦理学委员会批准，入组患者知情同意。

1.1.2试剂和仪器 人巨细胞病毒IgM和IgG检测试剂及IgG亲和力检测试剂盒及仪器均来自于郑州安图生物公司。巨细胞核酸检测采用美国生产的ABI7300型实时荧光定量PCR仪，试剂由广州达安提供。

1.2方法

1.2.1人巨细胞病毒IgM和IgG检测 采用化学发光法，厂家配套高低值质控品同步检测。灰区判断值分别为IgM 8～12 AU/ml；IgG 10～14 AU/ml。大于此范围即为阳性。

1.2.2巨细胞病毒IgG亲和力检测方法 包被HCMV抗原的96孔酶标板，分别加入低亲和力质控品、高亲和力质控品、稀释(1∶100)后待测样品100 μl/孔，各2孔，37℃温浴30 min，洗板6次后，一孔加入解离缓冲液，一孔加入对照缓冲液各100 μl，37℃温浴10 min，同上洗板后加入酶结合物100 μl，37℃温浴30 min，洗板后加入底物液和显色剂各50 μl，37℃避光10 min，加入终止液，混匀，检测吸光值，两孔比值为亲和力指数(Avidity index,AI)。

1.2.3巨细胞病毒核酸检测 PCR方法检测130位孕妇尿中HCMV-DNA含量，并对HCMV-DNA拷贝大于阈值的孕妇，随访产后胎儿状况，分别留取胎儿尿液、血液各一份，血液进行人巨细胞的IgM检测，尿液进行核酸定量检测。检测阈值为2 000拷贝/ml。

2 结果

102例(孕8～16周)血清样本亲和力指数>50%，判为高亲和力。HCMV-DNA均小于2 000拷贝/ml。胎儿均无不良结局。对低亲和力和灰区亲和力孕妇随访，以了解新生儿感染情况。实验数据显示，11例(孕8～16周7例，孕20周以上的4例)血清样本为亲和力指数在45%～50%，判为灰区，其中1例HCMV-DNA(孕28周)阳性，随访检测胎儿出生后尿液HCMV-DNA大于2 000拷贝/ml，血清巨细胞病毒IgM抗体阳性，诊断为先天性HCMV感染。17例(孕8～16周14例，孕20周以上的3例)

表1 入组孕妇巨细胞病毒IgG亲和力指数与不良结局

Tab.1 Cytomegalovirus IgG affinity index and adverse outcome in pregnant women group

Groupsn(%)DNA positiverateAdverse outcomesrateA group(AI>50%)102(78.46%)0(0)0(0)B group(45%≤AI≤50%)11(8.46%)1(0.77%)1(0.77%)C group(AI<45%)17(13.07%)7(5.38%)2(1.54%)

血清样本亲和力指数<45%，判为低亲和力，HCMV-DNA阳性7例。其中，胎儿出生后尿液HCMV-DNA大于2 000拷贝/ml 1例，血清巨细胞病毒IgM抗体阳性，诊断为先天性HCMV感染1例，流产1例。表1为AI结果与百分比。

3 讨论

IgM抗体被认为是近期或原发感染的指标。但是IgM抗体持续6～9个月阳性情况时有发生,实验室方法学也会有非特异性假阳性问题存在，临床医生很难推断是否真正感染以及感染时期。虽然可检测尿液中人巨细胞病毒核酸，但当前核酸阴性并不能排除前期感染的可能。

抗体亲和力是抗体的结合部位与相应抗原决定簇之间的非共价引力与斥力之和。亲和力检测可用于鉴别原发(近期)感染和复发(既往)感染。全军计划生育优生优育技术研究所发布的《妊娠期TORCH筛查指南》中建议HCMV-IgM和HCMV-IgG亲和力联合检测，可以确定妊娠妇女的感染诊断[4]。在妊娠16 周前检测抗体亲和力为高亲和力指数则是既往感染的良好指标[4]。人接触CMV抗原后，产生抗体亲和力随时间延长而增加，IgG抗体亲和力低说明为近期原发性CMV感染，抗体亲和力高说明感染发生在较长时间以前。感染后3个月内的血清样本HCMV-IgG亲和力指数一般为(21±13)%，既往感染的亲和力指数一般为(78±10)%[5]。有报道显示在妊娠16～18周之前检测HCMV-IgG亲和力指数，诊断胎儿感染的敏感度为100%，20周以后则迅速降为62.5%，因此 ，妊娠12～16周检测出高IgG抗体亲和力指数是诊断既往感染较好的指标[6]，对后续开展产前诊断更有参考意义。

在本文结果中A组标本均为孕8～16周的孕妇，AI>50%，提示孕前既往感染，胎儿无不良结局。在C组标本中AI<45%提示近期感染，胎儿不良结局率较高达到1.54%，说明病毒感染通过胎盘进入胎儿体内的风险较高。而在B组标本中有1例胎儿诊断为先天性CMV感染，标本为产妇孕28周时采集，不能排除是否原发感染，因此在孕早期进行TOUCH的筛查是非常重要的。

IgG亲和力检测判断感染类型虽早有报道，但是由于方法学差异，试剂优劣，判断标准也有很大差别。之前国内多采用尿素变性的方法检测亲和力，方法繁琐，特异性差。本文采用的ELISA方法检测IgG亲和力实验更便捷，结果更可靠。

综上所述，巨细胞抗体IgM检测方法多采用酶免法，影响实验结果的因素较多，如RF干扰、交叉反应、多克隆刺激等。而对于亲和力的检测，明确判断高亲和力和低亲和力的同时，可以有灰区的情况存在。建议2周后再复查[4]，动态监测血清IgM和IgG抗体的变化，并结合孕妇孕周、临床表现、流行病学病史及产前诊断技术综合评估感染风险，多指标多方法综合应用，才能更好地判断孕妇感染时期。