刘冰 杨智承 袁芳

广东药科大学药学院（广州510006）

肺癌类型包括非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）和小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC），其中NSCLC 占80% ～85%［1］。针对NSCLC，由于肺癌患者遗传背景的复杂性，以及现有靶向药物耐药等问题，导致目前治疗效果仍然不佳［2］。血小板衍生生长因子受体（platelet-derived growth factor receptor，PDGFR）在大多数细胞中均有表达，特别是在间质细胞高度表达和活跃，如成纤维细胞和平滑肌细胞。PDGF/PDGFR 信号通路可调控肿瘤细胞的增殖、分化和迁移，然而其抑制剂的抗NSCLC 作用研究仍然匮乏［3］。本研究在非小细胞肺癌A549 细胞上，探讨PDGFR 抑制剂CP-868596 的细胞毒性作用及其分子机制，以期为其临床使用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料实验中所用的培养基和胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）均购自Gibco 公司；CP-868596购自selleck 公司；细胞转染试剂Lipofectamine 2000 购Invitrogen 公司；兔抗人Nrf2 一抗、磷酸化Akt 一抗、内参β-tubulin 购自Abcam 公司以及羊抗兔二抗购自Proteintech 公司；DCFH-DA、MTT 均购于Sigma 公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.2 细胞培养A549 细胞和BEAS-2B 细胞购于ATCC 细胞库。将A549 细胞在含有10%胎牛血清的DMEM 培养基中培养，并将BEAS-2B 细胞在含10%胎牛血清的1640 培养基中培养，培养在37 ℃，含5%CO2的细胞培养箱内。

1.3 MTT 实验将对数生长期的细胞接种于96 孔板中，待24 h 贴壁后依次加入浓度梯度为0～200 nmol/L 的CP-868596，持续孵育48 h ，每孔加入MTT 溶液（5 mg/mL）10 μL 继续培养4 h，去上清，每孔加150 μL 的DMSO 溶液，待完全溶解后，于570 nm 处检测OD值。

1.4 细胞凋亡检测各组收取CP-868596 浓度为0、10、20 、40 nmol/L 处理24 h 后的A549 细胞，使用在4 ℃冰箱预冷后的PBS 洗涤，重复2 次，将洗涤后的细胞重悬于250 μL 的结合缓冲液中。在5 mL 的流式管中加入100 μL 的细胞悬液，在管中加入Annexin-V FITC 5 μL，之后避光继续加入20 μg/mL 的碘化丙锭溶液10 μL。混合后，在室温下避光孵育15 min，向管中加PBS 400 μL，并通过流式细胞仪分析。……