周宇博，吴红斌

1.桂林医学院 ( 桂林 541000);2.桂林医学院附属医院中医科(桂林 541000)

原发性痛经(Primary dysmenorrhea，PD)是妇科中的常见病，发病率高、危害大与不孕、乳腺疾病等密切相关[1-2]。壮医药线点灸疗法作为传统疗法在治疗原发性痛经有着明显的临床疗效，具有简便易行，无毒副作用的优势。但对于其作用机制不甚明确。寒湿凝滞型痛经由于寒湿损伤阳气失其温煦推动而致血瘀导致，而血液流变学能够较为客观地反映中医理论的血瘀状态[3]，故本研究通过动物实验，观察壮医药线点灸疗法对寒湿凝滞型痛经模型大鼠的血栓素B2及血液流变学的影响，探究其治疗机制。

材料与方法

1 实验动物及分组 选购由桂林医学院动物实验中心提供的SPF级雌性SD大鼠50只，要求9～10周龄，性成熟未交配。随机分为5组，即正常对照组、痛经模型组、壮医药线点灸组、桂枝茯苓组、针灸组。适应性饲养一周后开始造模。

2 药材及试剂 2号壮医药线(广西中医学院壮医药推广中心)、针灸针(规格：0.30 mm×40 mm，华伦医疗用品有限公司)、桂枝茯苓胶囊(江苏康缘药业股份有限公司批号Z10950005)、苯甲酸雌二醇(杭州动物药品厂，批号兽药字(2013)110202511)、缩宫素(安徽宏业药业有限公司，批号H34022979)、盐酸肾上腺素(远大医药，批号H42021700)、TXB2放免试剂盒。

3 试验方法

3.1 造模方法：除A组外其他组连续12 d皮下注射雌二醇使子宫同步化，首日及第12天0.8 mg/只、第2天至第11天为0.4 mg/只/d。第5天后连续7 d按每次0.3mg/kg每日皮下注射肾上腺素2次。第1次注射后2 h，将大鼠浸入5℃～8℃水中5 min至无力攀爬、出现寒战为宜。不擦干毛发放回饲养笼停食，2 h后再注射肾上腺素。在第12天末次给药24 h内、末次点灸30 min后腹腔注射缩宫素2U/只。

3.2 实验方法：A组不造模不治疗；B组造模但不治疗。三组干预组于该组造模的第5天开始干预，C、E组实验区备皮，参照方宗畴等《实验大鼠针灸俞穴图谱及针刺手法》取中极穴、双侧关元及三阴交。C组：在酒精灯上点燃药线线端，熄灭明火，将带火星的线端对准穴位，一按一灭即起为一壮，一穴灸五壮；D组用桂枝茯苓胶囊粉末水灌胃，剂量按50 kg成人体重折算每只大鼠灌胃量为人口服剂量的0.004倍；E组：取穴同药线点灸组，取平补平泻手法每穴留针15 min。

C、D组均将大鼠置于自制大鼠固定器中使其处于安静状态接受治疗。每天1次，连续7 d。

4 观察指标

4.1 血液流变学检测：第12天干预结束后对每组大鼠用10%水合氯醛(0.2 ml/kg)进行麻醉。固定于操作台上用静脉采血针心脏采血4～5 ml置于肝素管抗凝，标记后行血液流变学检测方法：采用全自动血液流变仪进行全血黏度(高、中、低切)、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞电泳时间、红细胞变形指数进行检测。

4.2 子宫组织血栓素B2(TXB2)检测：心脏采血后剖腹分离出子宫，用精密电子天平称取相同重量的同段子宫(200 mg)用冰生理盐水洗净后剪碎在冰浴下加入5 ml冰生理盐水，研磨匀浆制成均浆液，以2500 r/min在4℃离心15 min取上清液置于离心管，低温(-20℃)保存待测。采用放免法按照TXB2放免试剂盒说明书操作方法测定子宫组织中TXB2的含量。

结 果

1 大鼠全血黏度的比较 正常对照组全血黏度(高、中、低切)均比模型组低(P<0.05)，说明寒湿凝滞型痛经会导致全血黏度异常升高，模型组各指标均高于三组治疗组可见三种干预方法均能降低全血黏度；药线点灸组与针刺组及桂枝茯苓组疗效对比显示在全血黏度中的高切显著低于桂枝茯苓组(P<0.05)，而全血黏度中的低切高于针灸组(P<0.05)，其余指标比较则无显著性差异(P>0.05)。见表1。

2 其他血液流变学指标比较 模型组红细胞电泳时间、红细胞聚集指数、红细胞压积及红细胞刚性指数均比正常对照组高(P<0.05)，说明寒湿凝滞型痛经会导致血液流变学各项指标异常升高；且均高于三个干预组说明三组干预能改善痛经模型大鼠的血液流变性；药线组与另两组治疗组比较显示在大鼠红细胞压积低于桂枝茯苓组(P<0.05)，而红细胞聚集指数高于针灸组(P<0.05)，其余指标比较则无显著性差异(P>0.05)。见表2。

表1 五组全血黏度比较(MPa·s)

注：与药线点灸组比较，★P<0.05；与痛经模型组对比，*P<0.05

表2 各组大鼠其他血液流变学指标比较

注：与药线点灸组比较，★P<0.05；与痛经模型组对比，*P<0.05

3 各组大鼠子宫组织血栓素B2的结果比较 与痛经模型组的子宫组织血栓素B2比正常组及三个干预组均高，可见寒湿凝滞型痛经会导致子宫组织血栓素B2异常高表达，且三种干预措施能抑制其浓度升高，改善痛经程度；另外与药线点灸组浓度高于正常对照组但比痛经模型组和桂枝茯苓组低(P<0.05)。与针灸组对比无统计学意义(P>0.05)。可知药线点灸疗法在降低TXB2的程度强于口服桂枝茯苓而与针灸相当(图1)。

注：与药线点灸组比较，★P<0.05；与痛经模型组对比，*P<0.05

图1痛经模型大鼠子宫组织血栓素B2的结果

讨 论

原发性痛经属于中医“痛经”、“经行腹痛”的范畴[4]。根据前期的研究发现寒湿凝滞型是原发性痛经临床常见的证型[5]，多由经期前后感受寒凉，过食生冷或处于寒湿环境以致寒湿之邪客于冲任、胞中，损伤阳气，使其温煦推动，血为寒凝，经血阻滞胞宫、胞脉，气血运行不畅，“不通则痛”导致痛经。寒湿凝滞是寒邪侵袭机体引起体内血行不畅，血脉不通，血液瘀滞等中医的病理表现[3，6]。本实验模拟寒湿凝滞证形成的病因，将大鼠置于冰水中复制动物模型，大鼠出现喜扎堆、口唇泛白等表现符合该中医证候的特点。资料[7-8]证明，寒湿凝滞证一般都伴有血液流变学异常。血液流变学是血液病理变化的重要参数，能反映血液的黏滞性，浓稠性，聚集性和凝固性的特性。全血黏度，红细胞聚集，红细胞压积，红细胞刚性等指标的升高，提示血液呈高黏滞的状态，能够较为客观的地反映中医理论的血瘀状态[9]。本实验结果显示寒湿凝滞型原发性痛经模型组血流变各项指标升高，我们认为是在寒冷的侵袭下交感神经兴奋，引起血管壁损伤，使血管通透性增加，血液黏稠、血运不畅。血液处于黏浓聚的异常状态，一方面容易堵塞血管形成血栓，另一方面，血液流动异常也是激活血小板聚集，进而形成血栓的重要原因[10]。血小板活化时启动前列腺素代谢，生成具有相反生物活性的PGI2和TXA2。TXA2增多可导致血管痉挛加重，血栓形成加速，加重血瘀[11-12]。实验结果显示寒湿凝滞型原发性痛经组织中TXB2显著高于正常组，说明在模型组TXA2过表达，致使血小板聚集及血管收缩强度增加，加重血液凝集的表现。本研究发现寒湿凝滞型痛经的发生可能与组织中血栓素B2(TXB2)异常高表达有关，高表达的TXB2使得机体全身血液流变性和凝血机制失调，导致浓、黏、凝、聚的血液流变学异常变化，进而胞宫气血不畅“不荣则痛、不通则痛”。盆腔子宫周围微血栓形成，子宫的缺血乏氧的状态进一步加重子宫平滑肌痉挛最终形成痛经。

壮医药线点灸疗法是壮医最具特色的疗法之一，在临床上治疗寒湿凝滞型痛经日渐成熟、效果可靠[13-14]。壮医认为痛经的发生主要是因勒(血)不畅，瘀阻龙路，以致咪花肠(胞宫)堵塞所致[15]。本实验根据中医经络理论选用治疗痛经病的主穴关元、中极属任脉，且均位于胞宫周围，可疏通局部气血，具有温阳补肾、培元固本、通调冲任的作用。三阴交为足三阴经之交会穴，可调理三经气血。壮医药线点灸疗法通过直接灸灼患者体表的一定穴位或部位，以其药效及温热的局部刺激在人体的龙路、火路的体表气聚部位施以调气作用，使局部的血管、毛孔扩张，疏调龙路火路气机，调理“嘘勒”(气血)以达散寒逐瘀、行气活血、通经止痛之功效。胞宫，冲任气血畅通则经行腹痛消失，进而达到止痛之目的。实验研究证实壮医药线点灸治疗寒湿凝滞型痛经的机制为通过对以上穴位的温热刺激，使得药效经由经络深达脏腑并能降低异常高表达的血栓素B2(TXB2)，抑制血小板聚集和血栓形成，从

而改善血液流变学及子宫血供，使气血充足，胞宫得养进而缓解子宫平滑肌病理性痉挛，达到治疗痛经之效。