刘佳文 吕红艳 丁北川 张治国

非结核分枝杆菌(NTM)，也曾称为非典型分枝杆菌，是指除结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex， MTC)和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。现有的文献提示我国分离最多的NTM菌种为胞内分枝杆菌，在北方可达40%～60%[1]。近年来，随认识的提高和检查手段的提高，出现一些不常见的NTM菌种。四川省自贡市在国内首次报道外来分枝杆菌和奥巴涅分枝杆菌[2]。为探讨NTM分子菌种鉴定方法临床检查的应用意义,本研究对129株 NTM 临床分离株的菌种鉴定结果进行分析。

资料和方法

一、一般资料

NTM临床分离株来源于2014年北京老年医院(23株)、北京结核病控制研究所中心实验室(69株)、北京市昌平区结核病防治所(37株)，共计129株。

二、试剂及方法

采用芯片杂交法(中国江苏猎阵生物科技有限公司)和16S rRNA基因测序法鉴定分枝杆菌(北京六合华大基因科技有限公司)，2种方法实验操作者之间采用双盲法。芯片杂交法严格按厂家说明书进行操作。16S rRNA基因测序法来自文献[3]。

(一)芯片杂交法鉴定分枝杆菌

1.主要仪器及试剂：分枝杆菌菌种鉴定试剂盒(膜芯片法)(江苏猎阵生物科技有限公司)，ETC811基因扩增仪，多孔板恒温振荡仪(型号：MB100-4A)。

2.分枝杆菌分离株DNA的提取：(1)取相应数量的1.5 ml的提取管标记。(2)向每个提取管中加入200 μl的“解液A”。(3)用Tip头挑取少量培养的菌落，放到加了“解液A”的提取管中,盖上盖。(4)将提取管在超级恒温混匀仪中进行金属浴10 min(恒温混匀仪参数设置：振荡强度1600 r/min,温度95 ℃)。(5)金属浴后，12 800×g离心3 min,上清液即可作为扩增模板进行扩增。……