付玉和, 孙文丽, 黄震巨, 程 奇

1.中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081;2.杭州众测生物科技有限公司, 杭州 310052

重组酶介导链替换核酸扩增技术(recombinase-aid amplification,RAA)，是一种利用体内扩增技术实现在体外进行核酸快速扩增的新型扩增技术，即利用从细菌或真菌中获得的重组酶，在常温下形成酶和引物的聚合体，当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的互补序列时，在单链DNA结合蛋白的帮助下，打开模板 DNA的双链结构，并在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互补链，扩增产物以指数级增长[1,2]。RAA技术能在常温下以较短的时间实现核酸快速扩增，扩增产物可以通过琼脂糖凝胶电泳或实时荧光检测实现目的基因的快速检测。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)是指在基因组上单个核苷酸的变异形成的一种分子遗传标记[3]，在分子遗传学和各种遗传疾病的诊断和治疗中扮演着重要角色。目前普遍应用于SNP检测的技术,如变性梯度凝胶电泳、直接测序、DNA芯片技术等,存在着技术复杂、应用成本高等缺点[4]。因此研究开发潜在的具有大规模商业化用途的检测方法一直是研究的热点。通过扩增来实现目的基因的检测作为一种应用技术在过去几十年间迅猛发展，一直是检测的主流方法。利用3′→5′外切酶活性的具有校正功能的高保真酶实现SNP检测的研究也一直在进行中[5]。那么更进一步突变高保真聚合酶的3′→5′外切酶活性利用高保真聚合酶在扩增过程中的聚合反应非成熟性终止能力是否具有潜在的SNP检测能力尚未见研究报道。……