王芳 潘茂兴，2 蔡三金 梅志刚 冯知涛，2

1三峡大学医学院国家中医药管理局中药药理科研三级实验室（湖北宜昌443002）；2暨南大学医学院（广州510632）

微小RNA（microRNA，miRNA）是一类单链非编码小分子RNA，通过碱基互补配对原则与特定靶基因的信使RNA（message RNA，mRNA）的3′-UTR区结合，起到抑制mRNA 翻译或直接降解其特定mRNA 的作用［1］。miRNA 在细胞生长发育、分化、凋亡等方面扮演重要角色［2］，超过50%的miRNA 位于与癌症相关脆弱区和DNA 断裂点上［3］，且miRNA 的表达失调可参与控制脊索瘤［4］、乳腺癌［5］、结肠癌［6］等多种疾病的进程。目前许多miRNA 的靶基因尚未明确，探索其具体作用机制仍较困难，因此利用生物信息学准确预测miRNA 的靶基因，结合双荧光素酶报告实验进行靶基因鉴定对研究miRNA的后续作用机制显得尤为重要。

miR-16 在研究慢性淋巴细胞白血病时被发现［7］，可以通过靶向调控细胞周期素D1等基因诱导细胞周期阻滞从而参与细胞周期进程的调控［8］。miR-16 被证实为肿瘤抑制因子，它的下行调节可以影响肿瘤细胞的凋亡［9］，且与类风湿关节炎的发生发展密切相关［10］。研究［11］表明，miR-16 参与重度抑郁症的形成，提示miR-16 可能是调控神经细胞的一个重要miRNA。脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）可能是miR-16 的下游靶基因之一［12］，但对其确切性及具体机制的研究甚少。本实验通过miRNA 靶基因数据库预测rno-miR-16-5p 的靶基因，利用基因本体论（gene ontolog，GO）注释对靶基因进行分子功能和生物学分类，京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）软件对靶基因富集的信号通路进行富集性分析，并构建双荧光素酶报告实验载体，对预测出的靶基因进行鉴定，为挖掘rno-miR-16-5p 的功能奠定实验基础。……