张辉 周文平 刘刚琼 张文静 张金盈

1郑州大学第一附属医院心内科（郑州450052）；2郑州大学第三附属医院心内科（郑州450052）

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）进程中存在YKL-40 高表达［1］。本研究探讨YKL-40 RNA 干扰（RNA interference，RNAi）对载脂蛋白E 基因敲除小鼠（apolipoprotein E-deficient mice，apoE-/-小鼠）颈动脉AS 斑块的影响。

1 材料与方法

1.1 材料YKL-40 shRNA慢病毒载体目的基因序列为：5′-GCTCCAGTGCTGCTCTGCATA-3′。12 周龄雄性apoE-/-小鼠72 只，购自北京大学医学部，均采用高脂喂养。Trizol 试剂购自美国GIBCO 公司；油红O、单核细胞趋化因子-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）及脂蛋白相关磷脂酶A2（lipoprotein associated phospholipase A2，Lp-PLA2）等ELISA 试剂盒购自郑州森斯科贸生物制品有限公司。所有动物实验均经郑州大学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 小鼠AS 模型的建立及动物分组本研究采用左颈总动脉缩窄性套管法诱导AS 形成并建立apoE-/-小鼠AS 模型［2-3］：麻醉满意后apoE-/-小鼠颈正中切口，分离左颈总动脉，在动脉上套扎长3 mm 内径0.3 mm 的硅胶套管并固定［2-3］，术后缝合切口，继续高脂喂养。8 周后apoE-/-小鼠随机分为对照组（n = 24），病毒阴性对照（negative control，NC，n = 24）组和观察组（n = 24），再次分离左颈总动脉，去除硅胶套管并分别局部滴注生理盐水、阴性对照病毒（5 × 107TU）、YKL-40 RNA 干扰慢病毒（5×107TU）。6 周后收集斑块制作6 μm冰冻切片采用HE 和油红O 染色并进行病理组织学分析。

1.2.2 血浆MCP-1、Lp-PLA2及血脂水平测定小鼠麻醉后取血，离心后取上层血浆检测，测定Lp-PLA2、MCP-1、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、甘油三酯（triglyceride，TG）及总胆固醇（total cholesterol，TC）、水平。

1.2.3 组织形态学检测使用Image-Pro Plus 5.0图像分析软件对HE 染色及油红O 染色切片进行定量分析，检测斑块面积、纤维帽厚度及脂质含量。

1.3 统计学方法本研究采用SPSS 21.0 统计软件进行统计学分析，所有计量资料以均数± 标准差表示，正态性检验后进行单因素方差分析（ANOVA），两两比较采用Student-Newman-Keuls（SNK）检验，P ＜0.05认为差异有统计学差异。……