王平康　李立学　张祥　汪桂香

[摘要] 目的 探討支原体肺炎（MPP）合并细菌感染患儿T细胞亚群及降钙素原（PCT）检测的临床意义。 方法 选择2016年10月～2018年3月四川省简阳市人民医院（以下简称“我院”）儿科收治的MPP患儿106例，依据病原学检查结果分为单纯MPP组（41例）和细菌感染组（MPP合并细菌感染，65例），另选健康儿童50名为对照组，抽取静脉血检测PCT、C反应蛋白（CRP）、白细胞计数（WBC），采用荧光激活细胞分离仪（FACS）计数CD4+T细胞、CD8+T细胞。 结果 细菌感染组PCT、CRP、WBC均显著高于对照组和单纯MPP组（P < 0.05），单纯MPP组CRP显著高于对照组（P < 0.05）。细菌感染组和单纯MPP组CD4+T细胞显著低于对照组，细菌感染组CD4+T细胞低于单纯MPP组（P < 0.05）;细菌感染组和单纯MPP组CD8+T细胞显著高于对照组（P < 0.05）;细菌感染组和单纯MPP组CD4+/CD8+显著低于对照组，细菌感染组CD4+/CD8+低于单纯MPP组（P < 0.05）。ROC分析：PCT及T细胞亚群指标对细菌感染的诊断价值较高，其中PCT的AUC为0.8以上。 结论 MPP合并细菌感染患儿CD4+/CD8+降低、血清PCT浓度升高，T细胞亚群和PCT检测对于鉴别MPP患者有无合并细菌感染具有重要意义，结合其他辅助检查有助于早期准确判断病情，减少抗生素滥用。

[关键词] 支原体肺炎;细菌感染;T细胞亚群;降钙素原

[中图分类号] R725.6          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）05（c）-0081-04

[Abstract] Objective To explore the valve of detection of T cell subsets and procalcitonin （PCT） in children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia （MPP） combined with bacterial infection. Methods A total of 106 children with MPP was recruited from October 2016 to March 2018 in Department of Pediatrics， Jianyang People′s Hospital of Sichuan Province （"our hospital" for short）， and were divided into MPP group （41 cases） and bacterial infection group （MPP combined with bacterial infection， 65 cases） according to pathogeny examination， 50 cases of healthy children were recruited as control group. The blood were collected to count CD4+T cells， CD8+T cells by fluorescence activated cell sorter， and PCT， C reactive protein （CRP）， white blood cell （WBC） were detected. Results PCT， CRP and WBC in bacterial infection group were significantly higher than those in control group and MPP group （P < 0.05）， and CRP in MPP group was significantly higher than that in control group （P < 0.05）. CD4+T cells in bacterial infection group and MPP group were significantly lower than those in control group， CD4+T cells in bacterial infection group were lower than those in MPP group （P < 0.05）. CD8+T cells in bacterial infection group and MPP group were significantly higher than those in control group （P < 0.05）. CD4+/CD8+ in bacterial infection group and MPP group were significantly lower than those in control group， CD4+/CD8+ in bacterial infection group was lower than that in MPP group （P < 0.05）. ROC analysis showed that PCT and T cell subsets had a higher diagnostic value for bacterial infections， of which PCT AUC was more than 0.8. Conclusion CD4+/CD8+ reducted and serum PCT concentration elevated in children with MPP combined with bacterial infection. The detection of T cell subsets and PCT is of great significance in identifying whether MPP patients combined with bacterial infection. With the help of other auxiliary examinations， it can pricisely judge disease and reduce the abuse of antibiotics.

[Key words] Mycoplasma pneumoniae pneumonia; Bacterial infection; T cell subsets; Procalcitonin

感染性疾病是儿科中常见的疾病，尤以肺部感染最常见，常见的病原体包括细菌和支原体，支原体是一种非典型微生物，不同于细菌和病毒[1]，支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）主要通过呼吸道飞沫传播，患者一般为大龄儿童和青少年，流行病学研究显示，国内社区获得性肺炎中10%～30%由支原体感染导致[2]，国外研究中支原体感染占比更高，国内外研究均显示，支原体感染有增高趋势[3]。不同病原体感染导致的肺炎，早期缺乏典型临床表现，而目前常用的病原学检测方法病原体体外培养耗时较长，难以提供早期抗生素治疗的参考依据，容易导致过度治疗或延误治疗时机[4]。C反应蛋白（C reactive protein，CRP）和白细胞计数（white blood cell，WBC）对于判断细菌感染具有一定参考价值，但缺乏早期诊断的准确性。降钙素原（procalcitonin，PCT）是降钙素的前体之一，正常血液中几乎检测不到PCT，细菌感染时PCT水平显著升高[5]。T细胞亚群能够反映机体细胞免疫功能，对于鉴别感染具有参考价值[6]。本研究主要分析T细胞亚群和PCT对诊断患儿肺炎病原体的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年10月～2018年3月四川省简阳市人民医院（以下简称“我院”）儿科收治的支原体肺炎患儿106例（肺炎组），男55例，女51例，年龄6个月～13岁，平均（5.6±2.7）岁。纳入标准：①诊断标准符合《诸福棠实用儿科学》[7]MPP诊断标准;②初次就诊，就诊前未使用过抗生素治疗;③家长了解本研究内容且自愿参加本研究。排除标准：①严重肝肾功能障礙;②免疫系统疾病，近期其他严重感染或外伤;③高血压、心脏病、恶性肿瘤等;④合并病毒感染。患儿依据病原学检查结果分为单纯MPP组（41例）和细菌感染组（合并细菌感染，65例）。另选同期在我院儿保科体检的健康儿童50例为对照组，均排除近期感染、发热、既往免疫系统疾病等，其中男26例，女24例，年龄6个月～12岁，平均（5.5±2.8）岁。肺炎组及对照组儿童性别、年龄比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审查通过，所有患儿家属均了解本研究，并签署知情同意书。

1.2 诊断标准

支原体肺炎：弛张热或不规则发热，持续剧烈咳嗽;呼吸音粗，干、湿啰音或肺实变体征;胸部X线片表现为支气管肺炎、间质性肺炎、大叶性肺炎或肺门淋巴结肿大;血清MP-Ab-IgM阳性或寒冷凝集≥1∶32;白细胞正常或稍高，红细胞沉降率增快[7]。

1.3 研究方法

所有研究对象于纳入研究次日清晨抽取空腹静脉血9 mL，分3管保存，一管用检验PCT及CRP，PCT采用荧光免疫层析法，试剂盒购自广州天宝颂原生物科技有限公司（产品货号：TB00-012），CRP采用免疫比浊法，试剂盒购自美国BECKMAN公司（产品货号：B47970），操作严格按照说明书进行;一管用双标流式细胞法检测T细胞亚群水平，采用BD公司FACScalibur荧光激活细胞分离仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）进行分析，计数CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞;最后一管采用BECKMAN公司XE5000多功能血液生化分析仪进行血常规分析，记录WBC。将PCT及T细胞亚群指标结果分成7～8个组段，分别为PCT（ng/mL）：≤0.1、>0.1～0.2、>0.2～0.5、>0.5～1.0、>1.0～2.0、>2.0～3.0、>3.0;CD4+（%）：≤20、>20～25、>25～30、>30～35、>35～40、>40～50、>50;CD8+（%）：≤20、>20～25、>25～30、>30～35、>35～40、>40～45、>45;CD4+/CD8+：<0.25、0.25～<0.5、0.5～<0.75、0.75～<1.0、1.0～<1.5、1.5～<2.0、≥2.0;以细菌感染组为阳性样本，其他两组为阴性样本，进行ROC分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0进行统计分析，计量资料均为正态及轻微偏态资料，用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验;计数资料用百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验;诊断价值分析为ROC分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组生化指标比较

细菌感染组PCT、CRP、WBC均显著高于对照组和单纯MPP组（P < 0.05），单纯MPP组CRP显著高于对照组（P < 0.05），单纯MPP组与对照组PCT、WBC比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 三组T细胞免疫功能比较

细菌感染组和单纯MPP组CD4+T细胞显著低于对照组，细菌感染组CD4+T细胞低于单纯MPP组（P < 0.05）;细菌感染组和单纯MPP组CD8+T细胞显著高于对照组（P < 0.05）;细菌感染组和单纯MPP组CD4+/CD8+显著低于对照组，细菌感染组CD4+/CD8+低于单纯MPP组（P < 0.05）。见表2。

2.3 PCT及T细胞亚群指标对细菌感染的诊断价值分析

PCT的诊断指标AUC、Se和Sp都在0.8以上。而CD4+、CD8+及CD4+/CD8+等3个T细胞亚群指标稍次之（均P < 0.05），AUC、Se和Sp也在0.6以上。见表3、图1。

3 讨论

支原体是非细胞内生长的最小微生物，体积介于细菌和病毒之间，属于原核生物，不能离开宿主独立存活，它没有细胞壁，故作用于细胞壁的抗生素如青霉素等对支原体引起的感染治疗效果不佳[8]。支原体的膜蛋白具有抗原性，是其主要致病因子，可黏附于气道上皮细胞膜的受体上，其具体致病机制尚不清楚，不过学者普遍认为与免疫机制有关。支原体感染宿主后，刺激B淋巴细胞活化，产生特异性IgM、IgG、IgA，此外支原体还可引起宿主细胞膜抗原结构改变，诱导机体产生自身免疫抗体，引起病理免疫反应[9]。有研究发现，MPP患者IgE水平与支气管哮喘患者接近[10]，提示支原体不仅是引起感染的病原体，而且是诱发机体变态反应的过敏原。

支原体感染后，支原体作为抗原激活抗自身T淋巴细胞并影响T淋巴细胞亚群的比例，导致机体免疫调节功能紊乱，发生自身免疫反应[11]。CD3是成熟T细胞特有的表面标志，根据成熟T细胞表面CD分子表达差异将CD3+T细胞分为CD4+T细胞和CD8+T细胞两个亚群，两者的比例是反映机体免疫状态的重要指标，CD4+/CD8+比值降低表明机体细胞免疫功能受到抑制[12]。本研究结果显示，MPP患者CD4+T降低，CD8+T升高，CD4+/CD8+降低，与既往研究结果一致[13]。此外，本研究还发现，MPP合并细菌感染患儿CD4+T/CD8+T低于单纯支原体感染患儿，提示细菌感染加重MPP患者细胞免疫功能紊乱程度，在治疗时除了积极使用敏感抗生素外，还应考虑增强机体免疫功能。ROC分析也提示，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+都是有一定价值的诊断MPP合并细菌感染的指标，其AUC、Se、Sp均在0.6以上。

PCT是细菌感染的敏感指标，最早见于Assicot等[5]的研究，血清PCT是糖蛋白的一种，是降钙素的前体蛋白，无激素活性，血液中浓度<0.1 ng/mL，细菌感染时PCT进入血液，浓度可迅速增高10 000倍，研究显示，细菌感染2 h后即可检测到，6 h后急剧升高，可维持8～24 h[14]。PCT具有生成快、半衰期长、不受临床药物影响的特点，因此是鉴别细菌和非细菌感染的重要指标，有研究表明，其浓度与感染程度呈正相关[15-16]。本研究结果也显示，单纯MPP患儿与对照组相比，PCT浓度无明显改变，而MPP合并细菌感染患儿PCT浓度显著高于对照组和单纯MPP组。ROC分析提示，其可能是诊断MPP合并细菌感染的一个非常好的指标，ROC-AUC高达0.882。敏感度和特异度也都在0.8以上的高水平。

CRP是一种急性时相蛋白，在机体感染、应激和组织损伤时，迅速合成，能够激活补体、刺激淋巴细胞和单核/巨噬细胞，增强吞噬作用[17-19]，因此可根据CRP水平判断感染严重程度和治疗效果，但是CRP并不能鉴别感染病原，本研究结果显示，MPP合并细菌感染患儿CRP水平显著高于单纯MPP患者，提示后者体内感染程度更重。

WBC是临床最常用的炎症标志物之一，WBC是血液非特异性免疫的重要组成，一般细菌感染时WBC升高，病毒等感染时WBC无明显变化或者下降，WBC容易受患者年龄、生理状态、免疫功能、治疗等影响[20-21]，难以正确反映疾病状态，但是由于WBC检测迅速、费用低，仍然作为临床实验室检查的首选指标。本研究也发现MPP合并细菌感染患者WBC升高，而单纯MPP患者与对照组相比无明显改变。

综上所述，MPP合并细菌感染患儿CD4+/CD8+T降低、血清PCT浓度升高，对于鉴别MPP患者有无合并细菌感染具有重要意义，结合其他辅助检查有助于早期准确判断病情，减少抗生素滥用。

[参考文献]

[1]  Liu CL，Wang GQ，Zhang B，et al. Mycoplasma pneumoniae pneumonia in hospitalized children diagnosed at acute stage by paired sera [J]. Chin Med J （Engl），2010，123（23）：3444-3450.

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[3]  殷勇，陸权，闫晓莉，等.肺炎支原体感染的流行病学[J].中华儿科杂志，2016，54（2）：196-197.

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[5]  Assicot M，Gendrel D，Carsin H，et al. High serum procalcitonin concentrations in patients with sepsis and infection [J]. Lancet，1993，341（8844）：515.

[6]  郑秀芬，许亚茹，王岩，等.儿科常见急性呼吸道感染疾病超敏C-反应蛋白检测结果分析[J].中国煤炭工业医学杂志，2015，18（7）：1104-1107.

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