殷学伟 刘滨 魏慧霞 唐凯 毕宏生 郭大东

葡萄膜炎是一类临床常见、反复发作的自身免疫性眼病，可造成眼组织不可逆性损害。辅助性T细胞17(T helper 17，Th17)和调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)是近年来研究人员发现的CD4+T淋巴细胞亚群，其中Th17细胞介导免疫应答，而Treg细胞介导免疫抑制，二者在功能上互相拮抗[1]。在葡萄膜炎的发生发展过程中，Th17和Treg细胞发挥了重要作用。Notch信号通路是调节炎症反应和自身免疫性疾病、维持机体免疫平衡的重要信号通路，可通过调控naïve CD4+T 细胞向Th17、Treg细胞的分化而影响Th细胞的比例平衡[2]。有研究发现，龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan Decoction，LXD)具有较强的免疫调节作用，对前葡萄膜炎有较好的治疗效果[3]。动物实验表明，LXD可有效减少实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠前房炎症细胞浸润，促进机体免疫功能恢复[4]，但是LXD对Notch信号通路的调控以及对Th细胞分化的影响尚未完全清楚。本研究拟通过检测LXD对EAU大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1、DLL4、白细胞介素10(interleukin 10，IL-10)、IL-17基因和蛋白的表达变化，探讨LXD在葡萄膜炎发病过程中对Notch信号通路的调控及对Th17/Treg细胞比例平衡影响的作用，初步阐释LXD治疗葡萄膜炎的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料LXD配方颗粒(产品批号：1311007W，华润三九医药股份有限公司)；FITC-CD4、PE-CD8、PE-IL-17、APC-CD25、 PE-Foxp3(eBioscience公司，美国)；固定破膜试剂盒(BD公司，美国)；miRNA组织/细胞快速提取试剂盒(艾德莱生物科技有限公司，北京)；cDNA逆转录试剂盒、2×SYBR Green I试剂盒(QIAGEN公司，德国)；β-巯基乙醇、谷氨酰胺(Amresco公司，美国)；胎牛血清、1640培养液(HyClone公司，美国)；淋巴细胞分离液(Solarbio公司，北京)；大鼠Notch1、DLL4、IL-10、IL-17蛋白ELISA试剂盒(基因美生物科技有限公司，武汉)。……