高 宇，周耿瑶，方从文，周 健，程 坤，秦绪军，王 枫

太白楤木（aralia taibaiensis）是秦巴山区特产的药用植物，在民间主要用于肝、肾等多种急慢性炎症的治疗，药理学研究发现，皂苷类为其主要的药理学作用成分[1]。本课题组较早地对太白楤木成分特别是皂苷的药理学作用进行了研究，发现竹节参皂苷Ⅳa（CHS）的含量丰富，且具有很好的抗氧化以及抗衰老作用[2]。营养过剩引起的重要脏器如肝脏内脂肪沉积是多种代谢疾病的发病基础，有大量研究提示，活性氧（ROS）引起的氧化应激在此过程中发挥重要作用[3]。前期本课题已经证明CHS具有很好的抗氧化应激损伤的作用，本研究采用混合游离脂肪酸（FFA）诱导的人肝细胞L-02建立体外脂肪肝的细胞模型，观察CHS的保护作用，并从抗氧化应激和调控自噬的角度探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与设备 CHS购自狄尔格公司（南京）（HPLC≥98%）；胎牛血清（FBS）、高糖 DMEM 培养基和0.25%胰蛋白酶购自Gibco公司；油酸（OA）、棕榈酸（PA）、四甲基偶氮唑盐（MTT）和DCFH-DA染料购自Sigma公司；MitoSOXTM Red线粒体超氧化物检测试剂盒购自Invitrogen公司；BCA蛋白检测试剂盒购自Thermo公司；Western及IP细胞裂解液、MDA试剂盒购自碧云天生物公司；ULK1、p-ULK1、AMPK和p-AMPK抗体购自 Cell Signaling Technology公司；LC3抗体购自Novus公司；Tubulin抗体购自Bioworld公司；TG试剂盒购自北京普利莱公司；MDA试剂盒和线粒体分离试剂盒购自凯基生物公司；全波段酶标仪购自瑞士TECAN公司；蛋白电泳、转膜及成像系统购自美国Bio-Rad公司。

1.2 细胞培养及处理 人肝L-02细胞由中科院上海细胞库赠送，采用10%FBS的高糖DMEM，于5%CO2、37℃培养箱常规培养，待长至60%～70%融合，1×105个/孔，接种于 6孔板，。……