周良燚，陈金琴，余硕，陈必链，戴秋云

1.福建师范大学 生命科学院，福建 福州 350117；2.军事医学研究院 生物工程研究所，北京 100071

芋螺毒素是由芋螺毒腺分泌的一类活性短肽，通常由12～40 个氨基酸残基组成，富含二硫键。根据其保守的信号肽序列和半胱氨酸框架，芋螺毒素可分为A、M、O、P、S、T、I、V、Y、J 等 20多个超家族[1-2]；根据其药理学靶点的不同，芋螺毒素又可分为α、μ、ω、κ、δ、ψ、σ、ρ、加压素、惊厥剂、睡眠肽等药理家族[3-4]。ω-芋螺毒素由24～29个氨基酸残基组成，含3 对二硫键，半胱氨酸骨架结构为C-C-CC-C-C，二硫键连接方式为C1-C4、C2-C5、C3-C6[5]，主要作用于 N、P/Q 及 L 型钙离子通道[2,6-7]。类似ω-芋螺毒素半胱氨酸骨架结构的还有δ、μO、κ及γ家族芋螺毒素，分别作用于钾离子通道（如κ-PⅦA[8]）、钠离子通道（如μO-MrⅥB[9]）、nAChR（如δ-TxⅥA[10]）等。

N 型钙离子通道与疼痛位点的信息传递密切相关[11]。2004年美国上市的第1 个ω-芋螺毒素镇痛药物MⅦA 对晚期癌症、神经疼等有效,但其具有严重的副作用，如眩晕、行走失禁、幻想、震颤等症状，影响了其用药适从性[12-14]。本实验室发现的SO-3 对N 型钙离子通道的抑制作用和MⅦA相当，且SO-3 对金鱼的毒性显著低于MⅦA，对小鼠的行动影响也低于MⅦA[14]，目前SO-3 已经完成了临床前研究试验。为发现新的N 型钙离子通道的抑制剂，提供活性高、副作用低的镇痛分子，我们合成了来自泡芋螺（Conus bullatus）的2 种新型ω-芋螺毒素 Bu1（序列 CKGPGAKCLKT⁃MYDCCKYSCSRGRC-NH2）及Bu13（序列CKGPGA⁃SCIRIAYNCCKYSCRNGKC-NH2）[15]，并测定其作用靶标。结果表明，Bu1 和Bu13 选择性作用于N 型钙离子通道。该工作为设计新型N 型钙离子通道抑制剂提供了依据。

1 材料与方法

1.1 材料

HEK293T 细胞（ATCC）；鼠源电压门控钙通道质粒（α1B、α1A、α1C、α2δ1、β3）、eGFP（本实验室保存）；Fmoc-氨基酸、HOBT、HBTU（上海吉尔生化公司）；……