王鹏雁, 王昌明，郑增光

(1浙江医院重症医学科， 浙江 杭州 310013； 2桂林医学院附属医院呼吸科， 广西 桂林 541001； 3浙江省肿瘤医院病理科， 浙江 杭州 310022)

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是常见的慢性疾病，其主要病理特征为炎症反应和血管重塑。作为肺血管重塑的主要效应细胞，肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs)在炎症和创伤等刺激下具有合成和分泌功能[1-2]。Toll 样受体(Toll-like receptors, TLRs)可特异性识别多种病原成份，启动固有免疫反应，并进一步诱导适应性免疫应答。有研究显示[3]，在哮喘的气道重塑中TLR4信号通道可以调控支气管平滑肌细胞合成并分泌炎症因子；本课题组前期体外实验研究表明[4]，TLR4表达水平与COPD大鼠PASMCs合成和分泌功能有关，但其机制仍不清楚。白细胞介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinase, IRAK)家族是TLR与白细胞介素1受体信号通路中重要分子，参与细胞内信号网络控制和炎症反应。故本课题通过利用IRAK抑制剂为工具药，探讨其对LPS(lipopolysaccharide，LPS)诱导的COPD大鼠PASMCs分泌功能的影响。

材 料 和 方 法

1 实验动物

健康SPF级Wistar大鼠36只，体重(200±20)g，周龄8～10周，来自桂林医学院实验中心，许可证号为SCXK(桂)2013-0001。

2 主要试剂和仪器

脂多糖购自Sigma；红色果树香烟(贵阳卷烟厂出品，烟气烟碱量1.2 mg；焦油量15 mg)；澳洲进口胎牛血清和DMEM/F12培养基(Gibco)；抗α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA、IRAK-1和p-IRAK-1兔单克隆抗体 (Abcam)；抗β-actin鼠单克隆抗体(中国中杉金桥公司)；总蛋白提取试剂盒和BCA蛋白定量试剂盒(碧云天生物科技有限公司)；大鼠血小板源性生长因子AB(platelet-derived growth factor-AB,PDGF-AB)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6) ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物公司)。自制烟熏有机玻璃舱(规格91 cm×42 cm×62 cm)；细胞培养箱 (Memmer INC108)；……