王 霞，王少贤△，方朝义，王杰鹏，旷湘楠，赵 丹，王一旭

(1河北中医学院中医诊断教研室， 2河北省心脑血管病中医药防治重点实验室， 河北 石家庄 050200)

伴随着社会竞争日益激烈和生活节奏不断加快，紧张的工作环境、复杂的人际关系和沉重的经济压力等长期、慢性心理应激已成为威胁人类健康的重要因素。机体体重增长缓慢和饮食量下降，则是常见的慢性应激反应。本研究动态观察了慢性束缚应激大鼠摄食量及体重变化，并采用ELISA、Western blot和RT-qPCR方法分别测定其血清瘦素(leptin)水平及下丘脑弓状核(arcuate nucleus，ARC)中食欲调控因子瘦素受体(leptin receptor，LEPR)、神经肽Y(neuropeptide Y，NPY)、刺鼠相关蛋白(agouti-related protein，AgRP)、阿黑皮素原(proopiomelanocortin，POMC)和可卡因苯丙胺调节转录物(cocaine amphetamine-regulated transcript，CART)的表达情况，以探讨应激状态下机体出现摄食和能量代谢异常的中枢机制。

材 料 和 方 法

1 动物

雄性SD大鼠，体重180～200 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号为SCXK(京)2012-0001。动物饲养于清洁级动物房，光照明暗各12 h(明7：00～19：00，暗19：00～7：00),恒温、恒湿[室温(21±1)℃，相对湿度40%～60%]，自由摄食，饮水。

2 试剂与仪器

2.1主要试剂 Leptin和LEPR ELISA试剂盒购自Phoenix Pharmaceuticals；RIPA裂解液购自Pierce Biotechnology；兔抗AgRP抗体购自Santa Cruz Biotechnology；兔抗 LEPR抗体购自Invitrogen；兔抗POMC抗体购自Signalway Antibody；兔抗NPY和兔抗CART抗体购自Cell Signaling Technology; 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的山羊抗兔IgG购自北京中杉金桥生物公司；TRIzol购自Invitrogen；M-MLV反转录试剂盒购自Promega；SYBR Green I荧光定量PCR试剂盒购自Fementas。

2.2主要仪器 T10型手持电动匀浆器购自IKA； SpectraMax® Plus 384读板机(酶标仪)购自MD； ND2000型微量分光光度计购自Thermo； ABI 7300 型荧光定量PCR System购自ABI； DYY-Ⅲ型电泳仪、DYY-Ⅲ40B型转膜槽和DYCZ-24D型垂直电泳槽购自北京六一生物科技有限公司；凝胶成像系统购自UVP；……