万峰云，卢红艳，万雪晴，朱 玥，郝晓波

(江苏大学附属医院儿科， 江苏 镇江 212001)

肺泡II型上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cell，AECII)是肺内主要干细胞，能合成和分泌肺泡表面活性物质，并增殖及分化为肺泡I型上皮细胞(type I alveolar epithelial cell，AECI)，在肺发育及肺损伤中发挥重要作用[1-3]。 CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α，C/EBPα)是亮氨酸拉链转录因子家族成员之一，在细胞增殖、分化、信号传导、肿瘤发生、机体免疫及应激反应等方面发挥重要作用[4-5]。在肺脏中C/EBPα主要在呼吸道上皮细胞及AECⅡ中表达[6]。De Obaldia等[7]发现，C/EBPα启动子上游有Hes1结合位点，即N-box位点。Hes1是Notch信号中非常重要的靶基因，属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix，bHLH)转录因子。有研究表明,Notch信号可能通过介导bHLH转录因子表达，调控肺泡上皮和血管内皮细胞增殖、分化及迁移等生物学活动[8]。Notch1/Hes1信号是否调控C/EBPα表达从而影响AECII的增殖与分化，目前尚不清楚。本研究通过对Notch1/Hes1信号双向调控，探讨Notch1/Hes1信号是否调控C/EBPα表达从而影响AECII增殖及分化功能，为进一步深入研究其与急、慢性肺损伤和修复的关系奠定基础。

材 料 和 方 法

1 材料

人AECII购自赛百慷公司，细胞来源于人正常肺组织，采用AECII特异性表面活性蛋白C进行免疫荧光染色鉴定，纯度高于90%。胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自维森特生物技术有限公司；RPMI-1640培养基购自HyClone；TRIzol购自Invitrogen；PCR试剂盒购自TaKaRa；抗Hes1抗体购自Immunoway；抗Notch1及β-actin抗体购自Cell Signaling Technology；抗C/EBPα及水通道蛋白5(aquaporin 5，AQP5)抗体购自Santa Cruz；羊抗兔或抗鼠IgG和兔抗羊IgG购自南京福麦斯公司；PE标记的羊抗鼠Ig G购自上海翊圣生物公司；CCK-8 细胞活力检测试剂盒购自Biosharp；细胞周期检测试剂盒购自BD Biosciences；Notch通路激活剂重组人Jagged1购自R&D Systems；Notch通路抑制剂DAPT购自Target Mol。……