莫世贤，邓勇军△，刘焕鹏，李 珏，陈理军，赵金燕，张 良

(昆明医科大学第四附属医院/云南省第二人民医院 1胸外科， 2中心实验室， 云南 昆明 650021)

恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma，MPM)是一种起源于胸膜间皮细胞和胸膜下纤维结缔组织的侵袭性肿瘤，以早期诊断困难、预后差为特点[1-2]。在不同国家，MPM发病率差异较大，国外以澳大利亚最高，发病率大约为3.54/10万，国内每年发病率为0.3～0.5/10万，以云南最高，大约为8.5～17.75/10万[3-4]。目前对该病的诊断及治疗较棘手，早期诊断可以提高MPM患者的生存率，一些用于早期诊断的分子标志物包括间皮素(mesothelin)、癌胚抗原(carcino-embryonic antigen，CEA)、CA125、CA153、CA199和CD90等，但其特异性和敏感性均有限。

最近的研究发现纤蛋白3(fibulin-3)在MPM患者的血浆和胸水中水平显著升高，且特异性和敏感性较高[5-7]。Fibulin-3也叫含表皮生长因子结构的fibulin样细胞外基质蛋白1(epidermal growth factor-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1,EFEMP1)，属于fibulin家族中7个成员中的一员，含有493个氨基酸，是一种细胞外糖蛋白[8]。本研究将人恶性胸膜间皮瘤细胞系SMC-1进行常规培养，转染建立各种fibulin-3表达水平的SMC-1细胞，检测肿瘤细胞的细胞周期、凋亡及fibulin-3分子水平表达的变化，为进一步诊断和治疗MPM提供分子靶点和实验依据。

材 料 和 方 法

1 材料

人恶性胸膜间皮瘤细胞系SMC-1购自上海赛齐生物工程有限公司；以pLV-EGFP-2A为基础构建的过表达质粒和以pLVshRNA-mCherry-2A为基础构建的RNA干扰载体质粒购自北京英茂；感受态大肠杆菌DH5α购自北京博迈德。

2 主要试剂

胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、RPMI-1640培养基和双抗购自HyClone；Plasmid Mini Kit II和Endo-free Plasmid Mini Kit II购自OMEGA；Opti-MEM培养基和Lipo2000购自Invitrogen；兔抗人fibulin-3和间皮素(mesothelin)及鼠抗人β-actin抗体购自Sigma；HRP标记的羊抗兔和羊抗鼠Ⅱ抗购自KPL；……