郑海波 彭小雨 吴智勇 傅俊惠

【摘要】 目的 研究食管癌组织和癌旁正常组织中Ki67、TS、CerbB-2的表达水平及其对手术疗效和预后的影响。方法 44例食管癌切除术患者， 采用免疫组化检测食管癌组织和癌旁正常组织的Ki67、胸苷酸合成酶（TS）、CerbB-2水平， 分析食管癌组织和癌旁正常组织Ki67、TS、CerbB-2表达水平的特征及临床病理免疫组化因素对食管癌术后5年生存率的影响。结果 癌组织Ki67阳性率为95.5%（42/44）， 其中强阳性率为52.3%（23/44）;癌旁正常组织Ki67阳性率为2.3%（1/44）。癌组织TS阳性率为72.7%（32/44）;癌旁正常组织TS阳性率为27.3%（12/44）。癌组织CerbB-2阳性率为11.4%（5/44）;癌旁正常组织CerbB-2阳性率为2.3%（1/44）。癌组织Ki67阳性率远远高于癌旁正常组织， TS差别较小， CerbB-2无论癌组织或癌旁正常组织大多为阴性。随访至2018年4月底， 全部患者无失访， 死亡27例， 生存17例， 1、3、5年生存率分别为86.4%（38/44）、54.5%（24/44）、45.5%（20/44）。区域淋巴结转移阴性患者术后5年生存率高于阳性患者， 癌组织非Ki67强阳性表达患者5年生存率高于Ki67强阳性表达患者， 差异具有统计学意义（P<0.05）。区域淋巴结转移阳性、癌组织Ki67强阳性表达影响患者术后5年生存率。结论 Ki67水平越高， 肿瘤组织生长越活跃， 术后更容易出现复发转移。对Ki67高表达及合并淋巴结转移患者应该给予更积极的辅助放化疗。TS、CerbB-2水平对个体化治疗指导和预后判断没有明确意义。

【关键词】 食管癌; Ki67;胸苷酸合成酶;CerbB-2 ;疗效;预后

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.05.004

采用以手术为主， 联合放疗化疗的综合治疗方法是提高食管癌治疗效果的发展趋势， 但是手术前后放疗化疗的总体效果提高并不令人满意。哪些患者能夠从以术前为主的综合治疗中获益， 以及如何筛选特异性指标用以指导个体化治疗成为目前食管癌及其他一些恶性肿瘤的研究热点[1]。选择2010年8月～2013年12月本院采用免疫组化检测44例食管癌切除术后肿瘤标本中肿瘤和癌旁组织的Ki67、TS、CerbB-2水平， 随访至2018年4月底， 试图分析其与食管癌综合治疗效果的相关性， 初步评估这些指标在指导个体化治疗的临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择2010年8月～2013年12月于本院行食管癌切除术患者44例作为研究对象， 其中男35例， 女9例;年龄32～76岁， 平均年龄56岁;根治切除术39例， 姑息切除5例;TNM分期Ⅰ期2例， Ⅱ期17例， Ⅲa期25例;术后放疗11例， 术后复发放疗3例;患者病理类型均为鳞状细胞癌， 浅肌层2例， 深肌层6例， 肌层外36例;术后病理证实淋巴结转移癌23例（52.3%）。

1. 2 取材及免疫组化染色方法 手术标本取材取肿瘤组织和食管残端正常黏膜组织， 免疫组SP检测试剂盒， DAB显色试剂盒， 均购自福建迈新生物技术公司。试剂盒Ki67、CerbB-2、TS均为鼠抗人单抗， 迈新公司提供的阳性片作为阳性对照。免疫组化染色步骤严格按照说明书操作。

1. 3 免疫组化评分 Ki67阳性表达定位于肿瘤细胞核， 呈棕黄色颗粒。CerbB-2蛋白阳性表达定位于细胞质， 呈棕黄色或深黄色， 两者都是按阳性细胞所占百分比及着色深浅判定结果。计算阳性细胞百分比， 分为4级， 强阳性+++（>50%）， 阳性++（25%～50%）， 弱阳性+（10%～25%）， 阴性-（<10%）。TS结果判定：胞浆胞核出现棕黄色颗粒+， 深棕色颗粒++， 深黄色颗粒+++。

1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 食管癌组织和癌旁正常组织Ki67、TS、CerbB-2表达水平的特征 癌组织Ki67阳性率为95.5%（42/44）， 其中强阳性率为52.3%（23/44）;癌旁正常组织Ki67阳性率为2.3%（1/44）。癌组织TS阳性率为72.7%（32/44）;癌旁正常组织TS阳性率为27.3%（12/44）。癌组织CerbB-2阳性率为11.4%（5/44）;癌旁正常组织CerbB-2阳性率为2.3%（1/44）。癌组织Ki67阳性率远远高于癌旁正常组织， TS差别较小， CerbB-2无论癌组织或癌旁正常组织大多为阴性。

2. 2 临床病理免疫组化因素对食管癌术后5年生存率的影响分析 随访至2018年4月底， 全部患者无失访， 死亡27例， 生存17例， 1、3、5年生存率分别为86.4%（38/44）、54.5%（24/44）、45.5%（20/44）。区域淋巴结转移阴性患者术后5年生存率高于阳性患者， 癌组织非Ki67强阳性表达患者5年生存率高于Ki67强阳性表达患者， 差异具有统计学意义（P<0.05）。不同性别、浸润深度、肉眼根治术、TS表达、CerbB-2表达患者5年生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）。区域淋巴结转移阳性、癌组织Ki67强阳性表达影响患者术后5年生存率。

3 讨论

3. 1 术后检测癌组织中Ki67表达水平的临床价值 目前有较多报道采用免疫组化检测肿瘤各种标记来预测肿瘤的恶性行为及对各种治疗的敏感度 [2-5]， 其中以肿瘤组织的Ki67水平判断放疗敏感度方面应用较广。Ki67是在细胞增殖周期G1、S、M、G2期出现的核抗原， 以M期最高， 其表达的高低反映了细胞增殖状态， 因为放射线对增殖期细胞杀伤力较大， 细胞增殖活性越强， 放疗的敏感性可能越强。因此， Ki67在食管鳞癌组织中的表达程度可能作为判断该肿瘤放疗敏感性的指标之一， 是食管癌个体化治疗方案选择的重要参考。但是， Ki67水平越高， 肿瘤组织生长越活跃， 容易出现脉管癌栓、淋巴结转移、双灶癌， 术后更容易出现复发转移等。若早期出现远处转移， 局部疗效并未带来实际益处， 本组术后病理证实淋巴结转移者占52.3%， Ki67强阳性占52.3%， 说明放疗疗效除了可以参考放疗敏感指标Ki67水平外， TMN分期情况仍然是最重要的参考依据。在预后方面， Ki67强阳性患者5年生存率更差， 本组资料显示， 是否有淋巴结转移和是否Ki67强阳性对术后5年生存率的有显著影响性， 而不同性别、浸润深度、肉眼根治术、TS表达、CerbB-2表达患者5年生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）。手术后， 对肿瘤Ki67水平高患者及同时合并淋巴结转移者应该给予更积极的辅助放疗、化疗。

3. 2 术后检测癌组织中TS和CerbB-2表达水平的临床意义

在本组研究中， 癌组织TS阳性率高， 癌旁正常组织阳性率低。理论上组织细胞中TS水平与5-氟尿嘧啶（5-Fu）细胞毒作用呈负相关[6， 7]， 依此推测食管癌组织细胞比正常组织对化疗药5-Fu更加耐药。检测肿瘤组织TS水平并据此作为判斷化疗敏感性的指标， 实际意义不大。在对预后的影响方面， TS检测水平并未有显著性差异。CerbB-2表达在癌组织及正常组织均较低， 对食管癌的个体化治疗指导和预后判断价值不大。

3. 3 同时检测食管手术标本癌组织和癌旁正常组织肿瘤标志物的价值 一些恶性度较高、较早及较易发生远处转移患者到底如何准确界定其更适合手术还是非手术， 本研究试图通过检测癌组织和附带检测癌旁正常组织肿瘤标志物， 希望发现一些有价值的差异。在Ki67方面， 癌组织中和癌旁正常组织的差异比较大， 反映了癌组织中和癌旁正常组织细胞增殖状态生物学行为上的差异， 所以， 正常组织如果Ki67水平升高， 或许术后放疗、化疗有价值。而对检测肿瘤组织和瘤旁TS和CerbB-2结果的分析统计， 则未发现采取同时检测的应用价值。

综上所述， Ki67水平越高， 肿瘤组织生长越活跃， 术后更容易出现复发转移。对Ki67高表达及合并淋巴结转移患者应该给予更积极的辅助放化疗。TS、CerbB-2水平对个体化治疗指导和预后判断没有明确意义。

参考文献

[1] 王鑫， 祝淑钗. 食管癌综合治疗研究进展. 中华放射肿瘤学杂志， 2006， 15（1）：65-67.

[2] 任金山， 吴红芳 Ki67与食管鳞癌放疗敏感性的相关研究. 中国现代药物应用， 2011， 5（8）：37-38 .

[3] 黄大福， 陈德玉. EGFR， HER2预测食管鳞状细胞癌同步放化疗敏感性的价值 . 江苏大学学报（医学版）， 2009， 19（6）：519-521.

[4] 李瑞芹， 吴名耀. 食管癌放射治疗的相关基因及其蛋白表达的研究进展. 汕头大学医学院学， 2008， 21（2）：119-121.

[5] 葛红， 樊青霞. Caspase-3在食管鳞癌术前放疗前后的表达及与放疗后病理反应的关系的研究. 临床医学， 2007， 27（10）：79-81.

[6] 钱小军， 胡冰. TS酶与5-FU的关系及在消化道肿瘤个体化治疗中的应用. 安徽医药， 2010， 14（3）：252-254.

[7] 卓丽娟. 胸苷酸合酶与5-氟尿嘧啶耐药的关系. 福建医科大学学报， 2002， 36（2）：230-231.

[收稿日期：2018-08-10]