徐婧， 周有连， 徐豪明， 聂玉强

广州市第一人民医院、华南理工大学附属第二医院消化科(广东广州 510180)

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是常见的消化系统肿瘤之一，近年来其发病率有逐渐上升趋势。研究显示，CRC居我国癌症发病率和病死率的前5位[1]。一直以来，CRC筛查工作以粪便潜血结合结直肠镜为主，但面临内镜诊断流程多、患者依从性差、社区宣教普及困难等缺点。因此，寻找一种能够对CRC进行早期诊断和预后评估的肿瘤标记物刻不容缓[2-3]。循环游离DNA (circulating cell-free DNA，cfDNA) 是1948年发现的细胞外碎片DNA[4-5]，主要来自细胞坏死、凋亡。肿瘤细胞释放的cfDNA通常称为循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA/cell-free tumor DNA，ctDNA)，其中一些能反映肿瘤的特异性特征，包括体细胞突变和异常的DNA甲基化模式，被认为是极具临床运用前景的肿瘤标记物[6-9]。与组织活检比，检测ctDNA有许多方面的优点：(1)检测方法相对微创；(2)ctDNA能很好地代表患者肿瘤的特征，有很高的特异性；(3)通过动态监测ctDNA定量和定性变化，可实时对患者的疾病复发和治疗疗效进行判断；(4)检测ctDNA能全面地了解肿瘤的遗传学信息，避免组织活检因肿瘤的异质性而漏掉肿瘤部分生物学特征，从而更好地对患者的个体化治疗提供选择。本文结合国内外关于cfDNA的最新研究，对目前检测cfDNA的方法和cfDNA在CRC中的应用进展作一综述。

1 cfDNA检测方法

肿瘤细胞释放的cfDNA占外周血总cfDNA很小一部分，所以需要高敏感性的方法对其进行检测。常用的检测方法包括聚合酶链反应(PCR)和二代测序(NGS)包括全基因组测序和全外显子组测序等。基于实时PCR的检测方法广泛地应用于检测低线(LoD)为0.1%～0.5%的cfDNA测量，但当cfDNA用于检测或监测早期疾病时，ctDNA的比例往往低至0.01%。……