程芯育， 钟海凤， 徐绍业， 张聪慧， 韦睿妮， 邵晓云

桂林医学院 1研究生学院， 2生物技术学院， 3科学实验中心， 4人体解剖学教研室、 广西脑与认知神经科学重点实验室(广西桂林 541004)

鼠源去泛素化酶BRCC3(人的同源物称为BRCC36)是去泛素化蛋白酶中的一个重要成员，由BRCC3基因编码。BRCC3蛋白序列在人和小鼠中高度保守，其氨基酸序列同源性高达97.25%。BRCC3在哺乳动物的多种组织中均广泛表达，如大脑、心脏、肌肉、小肠和肾脏等，某些器官(如乳腺)出现癌变时，BRCC3呈高表达，推断BRCC3可作为癌症早期的分子标记物。BRCC3是典型的多功能基因产物，可通过去泛素化修饰参与DNA损伤修复[1]、NF-κB细胞信号转导[2]、细胞周期调控[3]、蛋白靶向运输[4]等多种细胞活动，与乳腺肿瘤[5]、心脏缺血缺氧损伤[6]、烟雾性综合征[6]、胶质瘤[7]等疾病的发生密切联系。本课题组前期研究发现，BRCC3在帕金森病(Parkinson′s diesase，PD)动物模型的大脑皮层组织中表达增高，但目前尚未见BRCC3去泛素化调节作用在PD疾病中的研究。2018年10月至2019年5月，本研究旨在构建以增强绿色荧光蛋白(EGFP)为载体的BRCC3质粒，期望为PD疾病的发生机制研究提供分子基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级健康C57BL/6J小鼠，雄性，体重22～25 g，7～8周龄，购于桂林医学院实验动物中心[SCXK(桂)2013-0001]，小鼠大脑皮层组织取材于桂林医学院实验动物中心动物实验室进行[SYXK(桂)2013-0001]。

1.1.2 主要试剂 pEGFP-N1载体(田波教授惠赠)，TRIzol Raegent(Takara公司)，大肠杆菌DH5α感受态细胞(全式金公司)，RNAase-free water、2×Es Mix、DL2000 Marker、DNA凝胶回收试剂盒、质粒DNA小量提取试剂盒、DNA分子量标准(康为世纪)，限制性内切酶、T4连接酶(NEB公司)，氨苄青……