邹 文 范少勇 周 明 侯慧铭 李骏宇

（南昌市洪都中医院骨伤十科，江西 南昌 330008）

静脉血栓是骨科术后常见也是最危险的并发症，是指血液高凝状态、静脉壁损伤、静脉血流滞缓等原因使得血液在静脉内凝结，导致血管阻塞。股骨是人体中最粗、最长的管状骨，其上包附着丰富密集的血管，股骨干骨折术后，下肢活动受限，血流缓慢，较其他部位更易处于高凝状态，形成血栓［1-2］。目前，西药是防治骨折术后静脉血栓的主要抗凝药物，其能有效且快速改善血液的高凝状态，但存在两点不足，第一，防治不彻底，经血管彩超复查时仍有血栓残留；第二，增加了出血风险。本实验拟以大鼠为模型，探索四妙勇安汤对大鼠股骨干骨折术后各项凝血指标的影响［3］。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物 60只 SPF级健康 SD实验大鼠，体质量（245.41±5.97） g，由南昌大学动科部提供，实验前适应性喂养，自由摄食、饮水，1周后用于实验造模。

1.1.2 仪器 手术器械：手术刀片、手术刀柄、持针器、有齿镊、血管钳、缝合丝线、眼科剪、眼科镊、显微剪、显微镊、手术拉勾、医用电钻、1 mm克氏针、尺子（上海医疗器械有限公司），BrillianceiCTSP型DR摄片机（德国飞利浦），全自动凝血分析仪（日本Sysmex），AL104电子分析天平（日本岛津），医用低速离心机（上海安亭科学仪器厂），YH-X-4A手术电子显微镜（武汉三丰医疗设备有效公司）。

1.1.3 药物与试剂 ①四妙勇安汤由金银花90 g、玄参90 g、当归60 g、甘草30 g组成，煎煮前浸泡10 min，先煎煮30 min取药液，再煎煮30 min取药液，合并2次水煎液，浓缩成浓度为1 g/1 mL的药液，灭菌后置于4℃冰箱保存备用。②生理盐水：四川科伦药业有限公司；低分子肝素钠注射液：1 mL：2500抗 Xa因子国际单位，深圳市天道医药有限公司，国药准字：H20056850；注射用青霉素钠：160万单位每支，华北制药股份有限公司，国药准字：H13020655。③戊巴比妥钠、双氧水、酒精、0.9%氯化钠均由洪都中医院提供。

1.2 实验方法

1.2.1 动物造模 腹腔注射标准为0.2 mL/100 g的戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉，取俯卧位，于大鼠右侧大转子下股骨干3 cm处切 1 cm切口，逐层切开，暴露股骨中段，将1.0 mm克氏针在此处钻3个小孔，止血钳细微扭转制造骨折，将1 mm克氏针钻入骨髓腔，自股骨干断端逐步达近端，利用手持C臂机透视克氏针观察其位置是否合适，而后于股骨远端处将克氏针折弯1 cm，置于皮下，伤口消毒后，缝合并用石膏固定，造模后第1、2天皮下注射青霉素钠预防感染。

1.2.2 实验方法与监测指标 3只大鼠于造模过程中死亡，造模后将剩余57只大鼠随机分为实验组（29只）、对照组（28只），实验组大鼠采用灌胃针从嘴角注射四妙勇安汤，2次/d，2 mL/只，连续1周；对照组大鼠的颈后缘皮肤提起后，注射器沿纵轴方向剌入皮肤注射低分子肝素钠注射液，2次/d，1 mL/只，连续1周。于造模后1 d、3 d、7 d采用眼眶取血，监测凝血指标D-二聚体（D-D)、凝血酶原时间（PT）、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）水平。

1.3 统计学方法 数据录入采用 Excel，数据分析采用SPSS 21.0软件，P＜0.05表示差异有统计学意义，具有可比性，计数资料用百分比表示，采用х2检验；计量资料用（x±s）表示，采用t检验。

2 结果

2.1 2组大鼠造模后D-二聚体水平比较 造模后第 1天2组大鼠 D-二聚体水平差异无统计学意义（P＞0.05），造模后第3天水平升高，且造模后第7天水平显著降低，实验组水平均显著低于对照组，2组比较差异有统计学意义 （P＜0.05），见表1。

表1 2组大鼠造模后D-二聚体水平比较 （x±s，μg/mL）

2.2 2组大鼠造模后PT比较 造模后第1天2组大鼠PT差异无统计学意义（P＞0.05），造模后第 3天 PT减少，且造模后第7天PT显著增加，实验组 PT均显著高于对照组，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 2 组大鼠造模后PT水平比较 （x±s，s）

2.3 2组大鼠造模后AT-Ⅲ水平比较 造模后第 1天 2组大鼠 AT-Ⅲ水平差异无统计学意义（P＞0.05），造模后第3天水平降低，且造模后第7天水平显著升高，实验组水平均显著高于对照组，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 2组大鼠造模后AT-Ⅲ水平比较 （x±s，μg/mL）

3 讨论

创伤对大鼠的刺激重大，极易引起应激反应，失血时机体为了自我保护，释放凝血因子，血液处于高凝状态，此时血液系统的凝血与抗凝血动态平衡被打破，血栓形成［4］。D-二聚体是急性血栓形成的一个敏感的标记物，主要反映纤维蛋白溶解功能，它的升高反映了体内存在着凝血，对于诊断纤溶系统疾病如各种血栓有重要的意义。凝血酶原时间主要由肝脏合成的凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平决定，血栓引起的凝血酶原时间缩短与凝血因子及纤维蛋白原异常增多有关，主要反映外源性凝血是否正常。抗凝血酶 Ⅲ是阻碍血液中活性凝血因子的重要物质，是一种含丝氨酸的蛋白酶抑制剂，与凝血酶形成复合物而使酶灭活，AT-Ⅲ缺乏可引起血栓，因此也是判断凝血的一个主要指标［5-6］。

由本次实验数据可知，大鼠造模后第1天，D-二聚体水平异常高，凝血酶原时间异常短，抗凝血酶Ⅲ异常高，主要由于机体产生了应激反应，红细胞聚集，内皮细胞紧密排列，血流变缓，凝血因子活性增强，促进凝血。造模后3 d，情况进一步加重，由于造模后，大鼠组织创伤处于修复状态，炎症因子释放增多，血管进一步收缩，血细胞进一步在组织内凝聚，大量附着在血管壁上，血栓的长度和体积扩大。造模7 d后，抗凝药物的作用逐渐发挥，

血栓溶解，静脉血流慢慢恢复。中医认为血栓属于“瘀证”“恶脉”“血瘤”“肿胀”等范畴，主要病因为气血瘀滞、痹着不通、湿热壅盛，治宜清热利湿、消退肿胀、通畅血脉、活血化瘀。四妙勇安汤出自华佗的《神医密传》，由金银花、当归、玄参、甘草四味药组成，方中重用金银花，其主要成分绿原酸、咖啡酸有清热解毒、宣散风热之功效，芳香透达可祛邪，甘寒清热而不伤胃，为君；玄参清热凉血，散结利咽，滋阴降火，养阴生津，为臣；当归行气止痛，补血活血，疏通经络，其主要成分阿魏酸有抑制血小板聚集作用、抗血栓之功效，为佐；甘草和诸药，缓急止痛，益气补中，其主要成分黄酮具有消炎之功效，与金银花配伍加强清热解毒之功，为使［7-8］。四药合用，君臣佐使配伍明确，既能活血散瘀，又能清热解毒，是治疗脱疽的良方，现代药理学表明，玄参和当归具有扩张血管和抑制血小板聚集作用，当归、金银花具有抗氧化和抗炎的作用，还有研究表明该方具有溶栓、抗凝、降低纤维蛋白原和调整免疫的功能［9］。

综上所述，四妙勇安汤治疗大鼠股骨干骨折术后抗凝效果明显，能够显著降低D-二聚体水平，延长凝血酶原时间，升高抗凝血酶Ⅲ水平，有效抑制骨折术后静脉血栓及凝血，为下一步推广运用于临床奠定基础。