李铭杰

【摘 要】目的：分析急性白血病免疫分型中流式细胞术的应用价值。方法：以149例急性白血病患者为研究对象，利用流式细胞术检测其免疫表型，观察检测结果。结果：149例患者中，分型诊断率94.6%（141/149）；在AML患者中，CD13、CD33抗原呈现出多表达，且CD13>CD33；在ALL患者中，]抗原表达率由高到低依次为CD19、CD10、CD13、CD20；免疫分型与形态学分型比较，AML符合率90.6%，ALL符合率76.6%。结论：急性白血病免疫分型中，流式细胞术具有较为准确的诊断结果，可广泛应用。

【关键词】流式细胞术；急性白血病；免疫分型

【中图分类号】R69 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）09--02

临床治疗急性白血病患者时，化疗方案的选择、预后的判断均需要依据其分型。通常，利用FAB分类法进行分型，但在确定急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病（ANLL）时，只有60%～80%的符合率，且预后预测及危险因素评估并无法进行[1]。近年来，临床检测急性白血病免疫分型时，越来越多的应用流式细胞术，尤其是成熟的发展一系列细胞单克隆抗体标记技术后，流式细胞术成为一种较为可靠的分型方法。本研究以149例急性白血病患者为研究对象，利用流式细胞术检测其免疫表型，检测效果较为理想。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以149例急性白血病患者为研究对象，收治时间2017年1月～2018年5月，均与急性白血病诊断标准相符合，患者如入院后经相应检查及多科室会诊确诊，其中，男81例，女68例；年龄12～73岁，平均（48.3±6.4）岁。

1.2 方法

1.2.1 形态学检查 化疗前，采集3～5ml骨髓，肝素抗凝，骨髓涂片后利用瑞氏染色处理，之后计数分类200个细胞，同时实施一系列的细胞化学检查，包含过氧化物歧化酶、糖原染色等，按照FAB分类法进行形态学分型。

1.2.2 免疫学检查 分析方案采取CD45-PC5/FITC/PE四色标记方案。用三种荧光抗体同时标记细胞表面抗原检测。各管不仅要标记CD45-PC5，同时，还要进行CD2-FITC/CD7-PE/34-APC、CD5-FITC/CD19-PE/CD20-APC、CD10-FITC/CD22-PE/CD38-APC、CD13-FITC/CD33-PE、CD15-FITC/CD117-PE/CD14-APC的标记，在CD45-PC5标记完细胞内抗原后实施处理，处理试剂采用IntraPrep通透化试剂，CD79a-PE、CD3-FITC、MPO-FITC标记同时进行。完成标记后，溶血经自动溶血仪进行，检测利用流式细胞仪。异常细胞采用CD45/SSC设门定位，之后再进行样本分析，阳性判定标准为阳性细胞超过20%，按照EGIL积分标准诊断免疫表型：①2分：cyCD3、、MPOcyCD79a阳性；②1分：CD2、CD20、CD10、CD5、CD33、CD19、CD13阳性；③0.5分：CD7、CD14阳性。至少2种系列积分2分以上时，可判断为急性混合性白血病。

2 结果

2.1 CD45/SSC设门结果 在各种细胞中，具有最强的CD45抗原表达的为淋巴细胞，最弱表达的为成熟粒细胞，单核细胞表达仅次于淋巴细胞，原幼细胞表达居于单核细胞之后，红细胞中无该抗原的表达；在细胞颗粒性方面，最强的为成熟粒细胞，单核细胞次之，原幼细胞表达强度居于第三位，接着是淋巴细胞，表达最弱的为红细胞。

2.2 免疫分型结果 149例患者中，髓系白血病（AML）89例，占59.7%；ALL41例，占27.5%；混合型（MAL）8例，占5.4%；未分化型（AUL）3例，占2.0%；剩余8例系列积分不足2分，难以确定结果；总诊断率94.6%（141/149）。在89例AML患者中，CD13、CD33抗原呈现出多表达，且CD13>CD33；在41例ALL患者中，表达率较高的抗原为CD10、CD19、CD20、CD13，由高到低依次为CD19、CD10、CD13、CD2。

2.3 免疫分型与形态学分型符合情况 形态学分型结果显示，AML患者96例，ALL患者47例。AML患者兩种分型符合率为90.6%（87/96）；ALL患者两种分型的符合率为76.6%（36/47）。

3 讨论

对于白血病，免疫学分型认识其细胞克隆特点及分化阶段时，以分化抗原的表达为依据，将白血病划分为不同的类型。近年来，临床上广泛的采用流式细胞仪确定急性白血病患者的免疫分型，此种仪器具有较高的敏感性、包含大量的信息，短时间内就能够定量分析大量的细胞，从而将细胞来源、生物学特性准确的反映出来，促进白血病诊断准确率的提高[2]。本研究定位异常细胞时，采用CD45/SSC设门法，该方法分析时参照多种参数，每种细胞的抗原表达强度各不相同，据此将具有较低分化程度的白血病细胞精确的区别于正常细胞，使白血病患者能够尽早的接受治疗。另外，本研究免疫分型结果显示，不同型的白血病患者系列抗原阳性表达率存在明显差别，在AML患者中，阳性表达率最高的为CD13，其次为CD33，前者不仅表达在髓系中，且成熟粒细胞中也存在，后者可标记髓前体细胞，且较高的表达于粒细胞和单核细胞内，因而依据白血病细胞的来源是否是髓系能够准确的划分免疫分型。

综上，急性白血病应用流式细胞术开展免疫分型诊断时，能够有效的补充传统的形态学分型，特别是能够将特殊类型明确的诊断出来，有助于更为精确的分型，从而科学的选择治疗方案，并准确的判断患者预后。

参考文献

翟冬芝，田亚宁，白英英，等.急性髓细胞白血病形态学及免疫学分型相关研究[J].世界最新医学信息文摘，2018（45）：27-29.

吕浩，黄宣，张智熊，等.试论多色流式细胞术在分析急性白血病患者免疫学表型中的应用价值[J].当代医药论丛，2016，14（03）：37-38.