王小艳，吴婷婷，庞斯斯，王 森

(南京医科大学第一附属医院 老年医学科，江苏 南京 210029)

快激活延迟整流钾电流(Ikr)是心肌细胞复极化的主要电流，抑制Ikr可使动作电位时程延长，引起早后除极，致心律失常的发生。编码人类心肌细胞Ikrα亚单位的基因为hERG(human ether-a-go-go-related gene, 或KCNH2)[1]。该基因突变可导致遗传性长QT综合征- 2 LQTS- 2，而许多抗心律失常药物及非抗心律失常药物对hERG通道的过度抑制是获得性长QT综合征的主要发病机制[2- 3]。将hERG基因转染至中国仓鼠卵母细胞(CHO)上发现hERG电流及其门控特性受温度的影响较大[4]。本实验观察在不同实验温度下心肌细胞Ikr电流的大小以及门控特性，为进一步研究心肌细胞Ikr提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：SPF级雄性豚鼠[南京医科大学实验动物中心，生产许可证号：SYXK(苏)2013-0015]，体质量250～350 g。

1.1.2 溶液：含钙台式液成分(mmol/L, pH 7.4): NaCl 143、 KCl 5.4、 NaH2PO40.25、HEPES 5.0、 MgCl20.5、CaCl21.8和D-glucose 5.6; 无钙台式液为含钙台式液中不加CaCl2。电极内液(mmol/L, PH 7.4): KCl 140、 CaCl21、 MgCl22、 HEPES 10、 EGTA 11、 Na2-ATP 5和creatine phosphate(disodium salt) 5; 电极外液(mmol/L,PH 7.4) NaCl 140、 KCl 3.5、 CaCl21.5、 MgSO41.4、 HEPES 10, 另外加入10 μmol/L nifedipine阻断L型钙电流以及10 μmol/L chromanol 293B阻断慢激活延迟整流钾电流。

1.2 方法

1.2.1 豚鼠心室肌细胞分离：采用酶解法制备心室肌单细胞。取豚鼠心脏,置4 ℃台式液中，心脏稍加修饰后连于Langendorff灌流装置上，经主动脉逆向灌流，灌流速度为7 mL/min，先以含钙台式液灌流2 min，继以无钙台式液灌流5 min，心脏逐渐停止跳动，予含II型胶原酶0.4 mg/mL和牛血清白蛋白1 mg/mL的无钙台式液消化10～15 min，剪下左心室置于KB液中，将左心室组织剪成小碎块，轻轻吹打3～5 min，以200目尼龙网过滤，500 r/min离心后弃上清液，加入新的KB液。室温保存2 h后选择边缘整齐、表面无颗粒、横纹清晰、无收缩的细胞用于全细胞膜片钳的记录。……