王杰 郭志远 冀云鹏 朱博 侯丽青 周燕 王晓华

1997年Lo等[1]在孕妇血浆中发现存在胎儿游离DNA。由此开始，国内外学者就胎儿游离DNA的生化特征及相应的各种细胞分子检测技术进行了不断的探索研究[2-3]，近年来，一种全新的无创产前DNA检测(noninvasive prenatal DNA testing, NIPT)方法被用于孕期胎儿染色体非整倍体筛查，该项技术在临床上得到了广泛应用。目前NIPT可以对 21-三体、18-三体和13-三体以及其他的性染色体非整倍体(sex chromosome aneuploidies, SCAs)等进行检测[4]，相对于传统的血清学筛查，NIPT研究的数据有着更高的准确性和更低的假阳性率[4-7]，但是NIPT对于SCAs的敏感度和特异性却略有降低[6-9]。本文通过对NIPT结果为SCAs高风险的孕妇进行追踪分析，综合胎儿和母亲信息探讨NIPT在SCAs检测中准确度降低的原因。

对象与方法

一、对象

选择2015年—2016年在本院经NIPT检测结果为SCAs高风险的3例样本，经告知谈话并签订知情同意书后，进行羊水穿刺胎儿染色体核型分析及孕妇外周血染色体基因芯片检测，对孕妇的白细胞进行染色体芯片检测，并对所有样本进行产后追踪随访。

二、方法：

1.无创产前DNA检测：抽取孕妇外周静脉血5 ml，置于EDTA抗凝管中，分别以1 600 rcf及16 000 rcf低温离心10 min后分离血浆；提取血浆中游离DNA及白细胞基因组DNA；对提取到的游离DNA利用index进行标记经加接头、PCR富集得到标本的DNA文库，经Qubit 2.0检测获得文库pooling，再经过乳液PCR扩增并上机测序获得原始数据。将测得的序列与已知人类参考基因组序列(hg19)比对确定每一测序reads染色体的定位；而后计算每一样本中每条染色体序列数目比率减去正常胎儿孕妇对照组的相应染色体reads比率的均值后，除以对照组相应染色体reads比率的标准差，最终得出标准化Z值。……