焦磷酸测序鉴定建泽泻方法的建立
2018-09-21
中国民族民间医药 2018年16期
福建省医学科学研究院/福建省医学测试重点实验室,福建 福州 350001
泽泻为多年沼生泽泻科植物泽泻Alismaorientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎,最早历史记载可追溯到《神农本草经》。其性寒味甘,有泄热、利水渗湿、化浊降脂的功效[1],主要有利尿[2]、降血糖[3-5],降血脂[6-9]等活性。泽泻主产福建、四川、江西等地,素有“建泽泻”、“川泽泻”、“江泽泻”之称,以建泽泻、川泽泻量大且使用广泛,其中又以建泽泻质佳,被载入中国的道地药材。目前主要采用性状鉴别和化学成分分析对泽泻进行鉴定,该方法鉴定结果主观性较强,准确性无法得到保证。焦磷酸测序技术(Pyrosequencing) 是一种基于酶催化反应的新一代测序技术,其精确性和可重复性高,并能够实时、直观地提供序列信息,同时能定性定量分析差异碱基。该技术利用生物素标记一条扩增引物,扩增产物无需荧光标记与电泳分离,因此操作更为简便、快捷。本实验采收福建省建瓯建泽泻药材,同时以川泽泻作为对照药材(采自四川省眉山),采用焦磷酸测序方法鉴定其基源,为今后泽泻的质量控制研究奠定基础。
1 仪器与材料
1.1 仪器 PCR仪(美国Bio-Rad);高速离心机(德国eppendorf);生物安全柜(青岛海尔特种电器有限公司);超微量核酸/蛋白分析仪(英国Biochrom);数显恒温水浴锅(江南仪器厂);电泳仪(六一仪器厂);暗箱式紫外投射仪(上海顾村电光仪器厂);实时定量焦磷酸测序仪(凯杰生物工程有限公司);恒温孵育器(德国eppendorf)。
1.2 材料 建泽泻药材采自福建省建瓯吉阳镇,川泽泻药材采自四川省眉山市彭山区谢家镇,经福建省医学科学研究院徐榕青研究员鉴定为泽泻科植物泽泻。……
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