孟 珊，范韶光，马 超，马秀芬，刘亚婧，苏玉华

(1.潍坊医学院附属医院 风湿免疫科，山东 潍坊261000；2.中国人民解放军第89医院 小儿骨科；3 .郓城县中医医院 内三科)

强直性脊柱炎的发生与多种因素有关，具体发病机制尚未完全明了[1]。有研究指出，在强直性脊柱炎的发生发展过程中，机体免疫功能受到严重影响，患者T细胞亚群数量可呈现出一定的失衡表现，提示T细胞免疫在强直性脊柱炎的发病过程中扮演着重要角色[2]。本研究主要探讨T细胞亚群中的辅助性T细胞以及调节性T细胞在强直性脊柱炎中的表达水平的变化情况及与强直性脊柱炎发病的相关关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年12月-2016年12月期间来院就诊的强制性脊柱炎患者65例为观察组，所有患者均符合1984年纽约修订的强直性脊柱炎诊断标准[3]，且未经任何治疗。排除入院前半年内接受糖皮质激素治疗者；排除合并急性感染及肿瘤患者；排除合并风湿病及其他自身免疫病患者；排除合并严重肝肾功能不全者；排除妊娠妇女。其中男34例，女31例，年龄18-56岁，平均年龄(31.32±2.42)岁。选取同期来院行常规体检的65例健康者作为对照组。两组患者一般资料无明显差异(P均>0.05)，具有可比性。全部患者均签署了关于本次试验的知情权同意书，通过医院伦理学审核。

1.2 方法

所有研究对象均抽取空腹静脉血5 ml，置于肝素钠抗凝负压真空采血管，常规4 000 r/min离心10 min，弃去上清液分离血清后，-80℃保存待用。外周血Th17细胞百分率、Treg细胞百分率、Th17/Treg细胞比例检测采用流式细胞技术，将血液样本常温复温后，加入淋巴细胞分离液，采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞，然后进行常规FTTC染色后进行流式细胞检测，所用仪器、试剂及试剂盒均由美国BD公司提供。外周血IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子水平检测采用双抗体夹心ELIAs法，所采用的试剂盒均来自于北京福瑞生物科技有限公司，检测步骤及方法严格按照试剂盒说明书要求进行，利用标准品建立吸光度与已知梯度浓度的标准曲线，通过样品的OD值计算与标准曲线的对应浓度来测定样品中目的白介素浓度。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 两组研究对象外周血炎性细胞因子分布情况

与对照组水平相比，观察组患者外周血IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子水平均明显偏高(P<0.05)，组间差异显著，具有统计学意义，见表1。

表1 两组研究对象外周血炎性细胞因子分布情况

2.2 两组研究对象外周血T细胞亚群分布情况

与对照组水平相比，观察组患者外周血Th17细胞数明显偏高(P<0.05)，其外周血Treg细胞数则明显偏低(P<0.05)，观察组患者外周血Th17/Treg比率明显高于对照组(P<0.05)，组间差异具有统计学意义，见表2。

表2 两组研究对象外周血T细胞亚群分布情况

2.3 两组研究对象外周血T细胞亚群分布情况与强直性脊柱炎发病相关性分析

观察组与对照组患者外周血Th17细胞数与Th17/Treg比率与强直性脊柱炎发病存在着明显的正相关性(r=0.567、0.483，P<0.05)，且观察组与对照组患者外周血Treg细胞数则与强直性脊柱炎发病存在着明显的负相关性(r=-0.982，P<0.05)。

3 讨论

强直性脊柱炎属自身免疫性疾病，根据患者发病程度的不同，其相关中轴关节及肌腱韧带附着处可出现不同程度的受累表现，主要好发于青壮年，发病往往较为隐匿[4,5]。随着病情进展，患者可逐渐由发病之初的腰背部疼痛转变为腰椎活动受限甚至脊柱僵直强直，严重影响患者的正常生活作息，是世界范围内较为严重的公共卫生问题[6,7]。

尽管目前关于强直性脊柱炎的发病机制尚不明确，但免疫系统在疾病发病过程中的调节与拮抗作用，已受到广泛重视。CD4辅助性T细胞是机体T细胞亚群中主要参与适应性免疫应答的T细胞，与巨噬细胞、B淋巴细胞以及肥大细胞的聚集和活化[8,9]。Th17细胞是近年来逐渐被认识的一类新型的Th细胞亚群，可合成并分泌Th17以及IL-22等细胞因子，可参与机体的炎症反应工程[10]。有研究表明，Th17细胞在真菌感染和细菌感染的中性白细胞活化中也扮演着重要角色，主要参与机体的局部微环境炎症介导，是系统性红斑狼疮等多种自身免疫性疾病中的促进因子[11]。Treg细胞属调控性T细胞，主要在机体的特异性免疫抑制中发挥调节作用，与机体的T细胞增殖抑制以及维持机体的免疫耐受均具有明显的相关性[12]。动物实验表明，许多自身免疫性疾病动物模型中，Treg细胞含量均明显降低，提示Treg细胞与机体的自身免疫有一定关系[13]。国外有文献指出，Treg细胞可通过抑制IL-10等炎性细胞抑制的分泌活性，影响相关转录因子FOXP3的功能，同时对Th17细胞也具有一定的阶段性增殖抑制作用[14]。除此之外，Treg细胞还可表达一种促进ATP水解作用的核苷酸，也可在一定程度上抑制T细胞的增殖效应，从而介导免疫损伤的发生。本研究结果显示，相较于健康人外周血水平，强直性脊柱炎患者外周血中Th17细胞百分比明显偏高(P<0.05)，而Treg细胞百分比则明显偏低(P<0.05)，且Th17/Treg细胞比率明显偏高(P<0.05)，提示Th17细胞、Treg细胞百分比及平衡比例与强直性脊柱炎的发生具有一定关系，进一步探究其相关关系发现，强直性脊柱炎患者外周血Th17细胞百分比及Th17/Treg细胞比率与强直性脊柱炎的发病呈显著正相关，患者外周血Treg细胞百分比则与强直性脊柱炎的发病呈显著负相关。进一步探究强直性脊柱炎发病过程中患者外周血中炎性细胞因子的分泌情况发现，强直性脊柱炎患者外周血中IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子表达水平均明显高于健康人(P<0.05)，提示炎症反应过程在促进强直性脊柱炎的发生发展过程中也发挥着一定的作用。