金巧 甘志凯 周鹏 刘霞

（南昌理工学院，南昌 330000）

Notch信号通路最初由Morgan和Bridges于1919年通过遗传研究发现，其主要调控细胞的凋亡、增殖和分化等重要生命过程［1］。在哺乳动物中，Notch 信号通路有4个受体（Notch1、Notch2、Notch3和 Notch4） 和 5个 配 体（DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2），其中2个配体Jagged1和DLL4在血管生成过程中起到重要作用，特别是DLL4，其主要在内皮细胞表达，从根本上调控肿瘤血管发生和生长［2-3］。

人源DLL4蛋白是I型单次跨膜蛋白，由658个氨基酸组成，其胞外区有与Notch 受体结合及活化的表皮生成因子（Epidermal growth factor，EGF）样的8个重复序列，1个高度保守的Delta/Serrate/LAG-2（DSL）区域和4个糖基化位点，分子量为57 kD，而胞内区在DLL4与Notch结合之后，会被剪切加工成活性位点，激活下游分子，调节基因的转录［4］。正常情况下，DLL4表达于脉管系统，如发育中的胚胎、成年组织血管新生过程中的动脉、小动脉及毛细血管的内皮细胞上，而静脉内皮细胞、血管平滑肌细胞和处于静止的血管不表达DLL4，病理情况下，可见实体瘤组织中DLL4表达量上调［5-7］。目前，在临床上，DLL4是一种新型肿瘤分子标记物，具有高敏性，可用于肿瘤预后诊断。此外，由于旧靶点抗体疗法耐药性的出现，通过阻断DLL4和Notch受体的结合抑制肿瘤血管的生成，从而达到抗肿瘤治疗效果，已成为一种新的癌症治疗策略。

本研究旨在通过HEK 293F细胞对人源DLL4胞外区蛋白进行瞬时表达，利用Dot blotting、Western blotting和Fortebio大分子互作仪检测DLL4的活性，同时制备兔子多克隆抗体，为下一步研究DLL4蛋白功能、开发临床肿瘤筛查试剂盒以及免疫治疗奠定基础。

图1 Notch信号通路配体和受体［2］

1 材料与方法

1.1 材料

人源DLL4 cDNA购自于北京义翘神州有限公司，tPA cDNA为本实验室保存，感受态DH5α购自于北京全式金生物技术有限公司。……