倪瑜 尹思淇 李会 史劲松 许正宏

（1. 江南大学药学院，无锡 214122；2. 江南大学生物工程学院，无锡 214122）

三羟基雄甾烯酮是德国先令公司推出的第四代女用口服避孕药有效成分屈螺酮的重要中间体［1-2］。自上市以来，“优思明”的销售额已占全球女用口服避孕药的首位，使得三羟基雄甾烯酮有着较大的市场需求［3］。传统的化学合成法是以醋酸去氢表雄酮作为底物来合成屈螺酮，需要反应步骤18步［4］。此合成路线反应条件苛刻，立体选择性差，产物收率较低，并且会产生大量的污染物［5］。随着微生物转化在甾体药物合成中的深入研究，具有将DHEA双羟化合成三羟基雄甾烯酮的菌株已被研究者从自然界中筛选获得，建立了生物-化学法合成屈螺酮的新工艺［6］，其中关键几步采用微生物转化法［7］。与传统化学合成法相比，甾体生物转化法具有较高的立体选择性，转化条件温和、环境友好等优势［8］，被誉为“绿色化学”［9-10］。目前，转化液中产物的分离提取通常是转化液经离心后，用亲水性有机溶剂萃取菌体，用非极性有机溶剂萃取上清液［11］，这种提取分离方式与传统方法直接用乙酸乙酯萃取相比，能够提高产物提取率。粗品浓缩后经柱层析洗脱、浓缩，重结晶获得所需纯品。

本实验室从土壤中筛选一株亚麻刺盘孢ST-1（Colletotrichumlini ST-1）菌株，可以直接催化底物DHEA 得到双羟化产物 7α，15α-diOH-DHEA。本实验首先优化转化液预处理的方式和萃取条件来提高产物提取率，进而优化柱层析中洗脱剂种类和比例，确定绿色高效的纯化条件，从而建立最适的生物法制备三羟基雄甾烯酮的分离提取工艺。……