怀思远，褚 楚，曹 静，赵志飞，吴 璇，冀天楠，李建雄解放军总医院 放射治疗科，北京 00853；云南中科灵长类生物医学重点实验室，云南昆明 650500

视网膜母细胞瘤是婴儿和幼儿最常见的眼内恶性肿瘤。我国每年新发小儿视网膜母细胞瘤1 100 ～ 1 500例，预后较差[1]。临床上根据视母细胞瘤发生发展的顺序将其分为4个阶段：眼内生长期、青光眼期、眼外期和全身转移[2]。视网膜母细胞瘤通常在后两个阶段才会被发现，这也就意味着错过早期治疗时机而只能姑息治疗。视网膜母细胞瘤发生发展与肿瘤抑制基因Rb1基因密切相关，通常是由于Rb1基因纯合突变和失活引起。目前，利用转基因技术和基因编辑技术构建了啮齿类动物、两栖动物和人类胚胎干细胞的Rb模型[3-6]。尽管这些模型具有视网膜母细胞瘤的表型，但其与人类视网膜母细胞瘤之间存在显著差异。非人类灵长类动物(如食蟹猴)的疾病模型可以更准确地模拟人类疾病，目前也已经成功建立非人灵长类动物模型，如肌营养不良症和Rett综合征猴模型[7-9]。因此，我们选择食蟹猴作为实验对象，以更好地模拟人视网膜母细胞瘤。近年来，基因编辑技术主要由ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9(聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9)系统组成[10-13]。在这3种系统中，CRISPR/Cas9最有效、最简单且细胞毒性最少，成为基因编辑建立动物疾病模型的最佳方式。CRISPR/Cas9基因编辑系统是一种基于古细菌对外源性核酸侵袭的免疫应答的新型基因编辑技术[14-15]。该技术由3种原核CRISPR免疫系统组成[16-17]。……