高红丽 辛毅 李卫萍 沈絮华 邸北冰 李虹伟

100050 北京，首都医科大学附属北京友谊医院心血管中心(高红丽、李卫萍、沈絮华、邸北冰、李虹伟)；100029 北京，首都医科大学附属北京安贞医院细胞培养室(辛毅)

研究表明，持续高血糖可引起体内多种蛋白质非酶糖基化，形成的晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)在糖尿病慢性并发症的发病中起重要作用。AGEs的特异性受体——晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end products，RAGE)最为重要。AGEs与RAGE相互结合加速了动脉粥样硬化的发生和发展[1]。研究表明，在RAGE基因敲除的糖尿病小鼠中，动脉粥样硬化斑块面积明显减轻。因此，抑制RAGE可减缓糖尿病导致的动脉粥样硬化进程。吡格列酮(pioglitazone，PIO)可激动过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors，PPAR-γ)，抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖。但鲜有报道PIO能否抑制高糖环境下的RAGE表达，且作用机制目前尚不清楚。本研究通过体外培养的VSMCs，探讨PIO对高糖诱导的小鼠VSMCs中RAGE表达的影响及作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

SPF级6～8周龄雄性C57BL/6小鼠，体重15～20 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。PIO、GW9662、RAGE抗体及PPAR-γ抗体(Abcam公司)；牛血清白蛋白、Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶(Sigma公司)；DMEM培养液、特级胎牛血清、0.01 mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS)(Gibco公司)；羊抗鼠α平滑肌肌动蛋白、异硫氰酸罗丹明标志兔抗羊二抗(Santa Cruz 公司)。超净工作台(北京昌平长城净化空气仪器厂)，二氧化碳培养箱(Thermo，Heracell 240，德国)，台式离心机(上海安亭科学器厂)。

1.2 实验方法

1.2.1 小鼠主动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定 颈椎脱臼处死小鼠，置于75%乙醇中浸泡2 min，固定后依次剪开胸腹部皮肤、肌肉层及胸骨，暴露胸腹腔，紧靠脊柱前方无菌条件下取出胸、腹主动脉，取主动脉中膜剪成约1 mm×1 mm的组织块备用。……